HIF2αによるヒト腎細胞癌の増殖機構の解析と新規治療薬の開発

HIF2α诱导人肾细胞癌生长机制分析及新治疗药物开发

• 批准号: 17791081
• 负责人: 近藤 慶一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791081/
• 关键词: 癌; 腎臓; 低酸素; HIF; 環境応答

今年度の研究では、pVHL(von Hippel-Lindau腫瘍抑制遺伝子産物)が正常に機能しておりHIF(Hypoxia Inducible Factor)1αとHIF2αのいずれもが低酸素環境下で誘導され得る腎細胞癌株ACHNを使用しました。この細胞にpBABE-vector(遺伝子を恒常的に発現し得るレトロウイルスベクター)とpRETRO-SUPER vector(shRNAを恒常的に発現するレトロウイルスベクター。いずれのベクターもProf. Kaelin(Dana-Farber Cancer Institute, USA)より譲渡)を用いて、HIFαのサブタイプを個々に発現増強もしくは発現抑制した細胞群(Polyclonal stable clones)を樹立しました。この細胞群をCell culture dishes上で培養し、その増殖速度を各細胞群間で比較してみましたが、有為な差は見られませんでした。これは既に他の研究室から報告されているHIFαの発現調整実験の結果と一致しています。現在この細胞群をヌードマウス皮下に投与しxenograftの成長速度を比較する実験を進めています。またこれらの細胞群でHIFにより転写が誘導される遺伝子の発現についてもウエスタンブロットによる比較を行いましたが、少なくともGlut-1(Glucose Transporter-1)についてはHIFαのサブタイプによる転写誘導の差は見られませんでした。他の転写誘導遺伝子についても現在ウエスタンブロットとリアルタイムPCRを用いて検討を行っています。現在進行中の実験結果を見た上で、マイクロアレイや2次元電気泳動+質量分析による未知のエフェクター遺伝子の同定を行っていく予定です。

This year's study showed that pVHL(von Hippel-Lindau tumor suppressor gene) has normal function, and HIF(Hypoxia Inducible Factor)1α and HIF2α are induced in renal cell carcinoma line ACHN under low acid environment. pBABE-vector(constant expression of shRNA) and pRETRO-SUPER vector(constant expression of shRNA) in these cells.いずれのベクターもProf. Kaelin(Dana-Farber Cancer Institute, USA) has been using HIFα to enhance the development of Polyclonal stable clones. The cell populations were cultured on Cell culture dishes, and the growth rates were compared among cell populations. The results of HIFα discovery adjustments reported by other laboratories are consistent. Now the cell population is growing faster than it is growing subcutaneously. The difference between the expression of HIFα and the expression of HIF α induced by Glut-1(Glucose Transporter-1) in cell populations was observed. He wrote the induction gene, and now it's in the middle of the discussion. The results of the experiment are shown in the table below, and the identification of unknown molecules in the two-dimensional electrokinetic + mass analysis is performed.