組織特異的プロモーターを用いたホルモン抵抗性前立腺がんに対する遺伝子治療の検討

使用组织特异性启动子检查激素抵抗性前列腺癌的基因治疗

• 批准号: 17791093
• 负责人: 古畑 壮一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791093/
• 关键词: 遺伝子; 遺伝子治療; 前立腺がん

本実験は内分泌療法抵抗性となった前立腺癌に対して、新たな治療法としての遺伝子治療を行うことを目的としている。今年度はPSAプロモーターのアンドロゲン応答配列の改変と、Plasmidでの発現効率について検討を行った。まず、PSAプロモーターのcodon452〜467のandrogen response regionについてレチノイン酸応答配列への置換を行った。Xho IとHind IIIのenzyme siteを両端にそれぞれ追加し、templateのshort PSAPCRで増幅、下流はluciferase内にあるsph I site (codon 753)とNar I site (codon 120)を利用してcodon467にHindIIIsiteを追加しluciferase内のsph I-Nar IをPCRで増幅した。HindIII siteの間にレチノイン酸応答配列をoligoで作成した単独のものと三個組み合わせたものをligationすることを試みた。oligoのサイズが小さいためにうまくligationされず、最終的にblunt endにしてligationを行いseqencingで配列を確認したが組み込まれてはいなかった。また内分泌療法抵抗性前立腺癌細胞株PC-3への遺伝子導入効率の検討も行った。(1)PEI(2)DMRIE-C(3)Lipofection(4)DOGSでの検討を行った。PEI>lipofection>DOGS>DMRIE-Cの順に高い導入効率を認めた。plasmidの作成が終わった際にvitroでの治療実験にはPEIを使う予定であった。

This is the first time that endocrine therapy has been used for the treatment of adenocarcinoma. This year, the PSA will be reviewed for changes in the distribution of plasma and the efficiency of plasma. The androgen response region of PSA is located at codon452 ~ 467. Xho I and Hind III enzyme sites are added at the end, template's short PSA PCR is amplified, downstream Luciferase is added at sph I site (codon 753) and Nar I site (codon 120) using codon467 HindIIIsite is added at sph I-Nar I PCR is amplified. Hindi site is composed of three sets of oligo. Oligo's final blend end is in the middle of the seqencing sequence. Study on gene transfer efficiency of endocrine therapy resistant prostate adenocarcinoma cell line PC-3 (1)PEI(2)DMRIE-C(3)Lipofection(4)DOGS PEI>lipofection>DOGS>DMRIE-C is a high import rate. The plasmid is made from vitro, and the treatment is made from PEI.