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卵巣癌における抗癌剤耐性機構の解明と治療への応用

卵巢癌抗癌耐药机制的阐明及其在治疗中的应用

基本信息

批准号：
17791116
负责人：
早川潤
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791116/
关键词：
卵巣癌(2)(3)(5)(6)(8)薬剤耐性 JNK AP-1 転写因子シスプラチン c-Jun ATF2 卵巣癌

项目摘要

卵巣癌における抗癌剤耐性に関わる制御遺伝子の同定解析と耐性の克服について前年度より引き続きヒト卵巣癌細胞株Caov-3細胞およびA2780細胞を培養使用した。これらの細胞株にシスプラチンを投与すると細胞内情報伝達物質JNK-AP1経路が活性化され、その活性化を抑制すると卵巣癌細胞株のシスプラチン耐性性が解除され、感受性になった。このシスプラチン感受性に関与するJNK-AP1経路の標的分子を同定するため、AP-1転写因子が活性化し結合している遺伝子を、ATF2およびcJunのリン酸化特異的抗体を用いたクロマチン免疫沈降法(ChIP assay)にて抽出した。ChIP assayの特異性はnon-immue IgG抗体をnegative controlとして用いた。抽出したDNAはアダプターを付加しPCR法にて増幅した。シスプラチン投与の有無によってATF2およびcJunに結合しているDNA量は増加しており、シスプラチンによるAP-1経路の活性化がより多くの遺伝子の転写を促進していることが示唆された。シスプラチン耐性機構に重要な役割を担うDNA修復に関与するDNA修復関連遺伝子(ERCC1,ERCC3,TopoisomeraseIなど)がJNK-API経路によって活性化しているかどうかを,各遺伝子のプロモーター領域でAP1結合部位を含む領域をampliconに設定し、ChIP assayにて抽出したDNAをテンプレートとしてPCRをいった。シスプラチンによって活性化されたATF2,cJunはERCC1,ERCC3,TopoisomeraseIの転写領域に結合していた。

Ovarian cancer cell line Caov-3 cells and A2780 cells were cultured and used in the past year. The intracellular signaling pathway JNK-AP1 was activated and inhibited by the administration of the protein in these cell lines, and the resistance of these cell lines to the protein was removed and the sensitivity was inhibited. The sensitivity of this protein was correlated with the molecular identity of JNK-AP-1 pathway. The AP-1 pathway factor was activated, bound to the JNK-AP-1 pathway, and the ATF2 pathway and cJun pathway specific antibodies were extracted by ChIP assay. The specificity of the ChIP assay is non-immue IgG antibody negative control. DNA amplification by PCR The amount of DNA binding to ATF2 and cJun increased, and the activation of AP-1 pathway promoted the development of DNA. DNA repair-related genes (ERCC1, ERCC3,TopoisomeraseI), which are important for DNA repair, are activated in the JNK-API circuit, and the AP1 binding site in each gene domain is amplicon, ChIP assay is amplicon, and DNA is extracted. The active ATF2,cJun and ERCC1, ERCC3,TopoisomeraseI are combined in the field of writing.