癌関連遺伝子のDNAメチル化異常を指標とした子宮体癌の早期診断と治療戦略の構築

以癌症相关基因DNA甲基化异常为指标的子宫内膜癌早期诊断及治疗策略制定

• 批准号: 17791135
• 负责人: 阪埜 浩司
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791135/
• 关键词: 子宮体癌; DNAメチル化; hMLH1; 癌関連遺伝子; DNAメチル化異常

【方法】癌においてDNA異常メチル化によって不活化される遺伝子はDNA修復、細胞接着、シグナル伝達、細胞周期関連など極めて多彩である。我々はIRBの承認と、患者の同意を得た上で、子宮体癌56例(類内膜腺癌46例、腺扁平上皮癌10例)、異型子宮内膜増殖症(AEH)14例および正常内膜27例由来の細胞診液状検体97例を用いて、hMLH1、E-cadherin、APC、p16、RAR-6、CHER遺伝子の計6種の癌関連遺伝子の異常メチル化を解析した。細胞診液状検体よりDNAを抽出し、亜硫酸水素ナトリウム処理し、DNA上の非メチル化シトシンをウラシルに変換させる。各遺伝子のプロモーター領域のCpGアイランドの塩基配列から作成したメチル化特異的および非メチル化特異的プライマーセットを用いてPCR反応を行い、各遺伝子のプロモーター領域の異常メチル化を解析した(MSP法)。異常メチル化を示した検体においては、その遺伝子の発現低下を組織において免疫組織化学染色法にて検討した。【成績】解析した97例の細胞診検体すべてでMSP法による解析は可能であった。子宮体癌症例の44.6%にhMLH1、22.0%にAPC、14.0%にE-cadherin、13.3%にCHFRの異常高メチル化を認めた。hMLH1およびE-cadherinに異常メチル化が認められた症例は、有意にタンパク発現が低下していた(hMLH1:p<0.01 E-cadherin:p<0.05)。また、CHFRの異常メチル化は低分化型腺癌の28.6%に検出され、高分化型、中分化型に比べ有意に高頻度であった(p<0.05)。一方、p16の異常メチル化は検出されなかった。また、AEHの14.3%にhMLH遺伝子の異常メチル化を認めた。しかしながら、正常子宮内膜には6種の癌関連遺伝子の異常メチル化は認められなかった。子宮内膜の発癌過程において、正常内膜には認められない特定の癌関連遺伝子の異常メチル化が認められ、その中でもhMLH1遺伝子の異常メチル化が最も高頻度であり、子宮体癌の初期病変であるAEHにおいても認められたことから、hMLH1遺伝子の異常メチル化を分子指標とした微量検体による癌の存在診断や発癌のリスク診断の可能性が示唆された。

[方法]癌症中DNA异常甲基化灭活的基因非常多样化，包括DNA修复，细胞粘附，信号传导和与细胞周期相关的基因。 With IRB approval and patient consent, we analyzed the abnormal methylation of six types of cancer-related genes, including hMLH1, E-cadherin, APC, p16, RAR-6, and CHER genes, using 56 cases of endometrioid adenocarcinoma (46 cases of endometrioid adenocarcinoma and 10 cases of adenosquamous cell carcinoma), 14 cases of非典型子宫内膜增生（AEH）和27例正常内膜基因，以分析六种类型的癌症相关基因的异常甲基化。 DNA从用亚硫酸钠处理的细胞学液体标本中提取，DNA上未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶。使用甲基化特异性和非甲基化特异性引物组进行PCR反应，该集由每个基因的启动子区域的CpG岛的基础序列产生，并分析每个基因启动子区域的异常甲基化（MSP方法）。在表现出异常甲基化的标本中，通过免疫组织化学染色研究了基因表达的降低。 [结果]分析了所有97个细胞学标本的MSP方法分析。在44.6％的子宫内膜癌病例中观察到HMLH1的异常高甲基化，在22.0％中观察到APC，在14.0％中观察到E-钙粘着蛋白，并且在13.3％中观察到CHFR。 HMLH1和E-钙粘着蛋白中甲基化异常的病例显着降低了蛋白质的表达（HMLH1：P <0.01 E-钙粘蛋白：P <0.05）。此外，在分化差的腺癌中，在28.6％的腺瘤中检测到了CHFR的异常甲基化，这比分化良好的和中等分化的明显频率（p <0.05）。另一方面，未检测到p16的异常甲基化。此外，在AEH的14.3％中观察到了HMLH基因的异常甲基化。但是，在正常子宫内膜中未观察到六个与癌症相关基因的异常甲基化。在子宫内膜的癌变期间，观察到在正常内膜膜中未发现的某些与癌症相关基因的异常甲基化，并且在其中，其中最常见的HMLH1基因的甲基化异常是最常见的，并且在使用AEH中观察到了AEH，使用AEH，表现出了癌症的早期危害，可以诊断出癌症的早期风险。 HMLH1基因作为分子指标的甲基化。

项目成果

Hypermethylation in the p16 promoter region in the carcinogenesis of endometrial cancer in Japanese patients.

日本患者子宫内膜癌发生过程中 p16 启动子区域的高甲基化。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Anticancer Res. 26
• 作者: Yanokura M;Banno K;et al.
• 通讯作者: et al.

Successful analysis of anticancer drug sensitivity by CD-DST using pleural fluid and ascites from patients with advanced ovarian cancer.

使用晚期卵巢癌患者的胸水和腹水通过 CD-DST 成功分析抗癌药物敏感性。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Anticancer Res 95(4)
• 作者: Kawaguchi M;Banno K et al.
• 通讯作者: Banno K et al.

Hypermethylation in the p16 promoter region on the carcinogenesis of endometrial cancer in Japanese

p16启动子区高甲基化与日本子宫内膜癌的发生有关

• 发表时间: 2006
• 期刊: Anticancer Res 26(2)(印刷中)
• 作者: Yanokura M;Banno K et al.
• 通讯作者: Banno K et al.

Relationship of aberrant DNA hypermethylation of CHFR with sensitivity to taxanes in endometrial cancer.

• DOI: 10.3892/or.17.1.41
• 发表时间: 2007
• 期刊: Oncology reports
• 影响因子: 4.2
• 作者: Megumi Yanokura;K. Banno;M. Kawaguchi;N. Hirao;A. Hirasawa;N. Susumu;K. Tsukazaki;D. Aoki

臨床腫瘍内科学入門

临床肿瘤学导论

• 发表时间: 2005
• 作者: Yamagami W;Banno K;et al.;金倉 譲
• 通讯作者: 金倉 譲