蛋白質導入法およびsi-RNAを用いた口腔癌に対する治療法の開発

使用蛋白质导入法和si-RNA开发口腔癌治疗方法

• 批准号: 17791433
• 负责人: 足利 雄一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791433/
• 关键词: 細胞内蛋白導入法; si-RNA; p53; 口腔扁平上皮癌; 蛋白導入; MTT assay; invasion assay; Zymography

現在までに以下の蛋白導入ドメインに結合したp53蛋白の精製のためのプラスミドの作成が終了しているTAT-p53,K_8-p53,K_<10>-p53,K_<12>-p53,R_S-p53,R_<10>-p53,R_<12>-p53,H_8-p53,H_<10>-p53,H_<12>-p53(K:リジン,R:アルギニン,H:ヒスチジン)TAT-p53に関しては、蛋白の精製も終了しており、HeLa細胞に迅速に導入されることが明らかとなった。すなわち導入を開始して30分後にはウエスタンブロティングにて多量のTAT-p53蛋白が細胞内に導入されていることが明らかとなっている。したがって、現在、導入されたHeLa細胞の増殖速度の変化、アポトーシスの誘導について検索しているところである。一方、他の蛋白導入ドメイン結合p53に関しては大腸菌にて蛋白は産生されるのだが、蛋白を濃縮する過程において多量に析出してしまい、高濃度の蛋白の精製に手間取っているところである。すなわち、蛋白の精製の過程で精製蛋白が溶解している水溶液の塩濃度を下げなければ実験に用いることができないのだが、塩濃度を下げることによって蛋白が凝集してしまい、現在解決策を模索中である。解決策の一つとして、クロマトグラフィーを用いて蛋白の精製をすることを考えている。EGF receptorの発現を抑制するsi-RNAの合成に関しては現在5つのパターンを作成してみたが、口腔癌細胞に導入してもFGF receptorの発現量に差があまり見られなかったため、現在別のsi-RNAの作成に取り掛かっているところである。

Now the following protein introduction and purification of p53 protein are completed: TAT-p53,K_8-p53, K_ -p53, K_<10>-p53<12>, R_-p53,R<10>_-p53<12>, H_8-p53, H<10>_-p53 <12>(K: p53, R: p53,H: p53). 30 minutes after the start of TAT-p53 protein introduction, a large amount of TAT-p53 protein was introduced into the cell. Changes in the growth rate of HeLa cells, changes in the induction rate of HeLa cells, and changes in the induction rate of HeLa cells. The introduction of protein from one side or another is related to the binding of p53 to protein production in Escherichia coli, protein concentration, and purification of protein at high concentrations. In the process of protein purification, the concentration of purified protein in aqueous solution is reduced, and the protein is aggregated. The solution to this problem is to refine protein by using the protein. EGF receptor production is inhibited in the synthesis of si-RNA, which is related to the production of si-RNA in the present 5 days, the introduction of EGF receptor into oral cancer cells, and the production of si-RNA in the present 5 days.