NOおよびNO関連物質を応用したヒト骨髄細胞の効果的増殖・骨誘導技術開発

点击翻译按钮获取中文摘要

手術材料として採取したヒト由来骨髄細胞、またはマウス由来骨芽細胞の単一細胞系株を研究対象とした。必要に応じてprimary cultureの細胞系で確認した。まず、ヒト由来骨髄細胞において増殖性因子および分化培地の条件の違いによる細胞増殖曲線の変動およびアルカリフォスファターゼ染色での骨芽細胞への分化能の評価を行った。併せて、NOある旨いはNO関連物質、サイトカイン等への反応活性を検討した。その結果、増殖性の低下が反応活性の低下に直結するという結果を見出した。その骨芽細胞の形質を念頭におき、効果的な継代時期を検討し、細胞外環境の至適条件を確立した。NOの細胞内シグナル伝達機構においてもCa2+が関与している可能性に着目し、NOあるいはNO関連物質を投与したときのCa^<2+>の濃度変化をCa^<2+>感受性蛍光試薬を使ってリアルタイムに二次元画像として記録した。生細胞の状態での反応変化を個々の細胞レベルで測定し、NOのCa^<2+>シグナルへの影響を検討した。この結果、細胞内NOの増加に伴って細胞内Ca^<2+>濃度が変動する現象を見出した。その流入経路について検討を進め、多くの知見を得た。その流入経路はほぼ同定され、その確証実験を繰り返した。その流入経路はeNOSを介しており、eNOSによって構成的に産生されるNOは骨形成作用を持つことから臨床応用の可能性が高いと考えられた。また、mRNAレベルでの反応活性について、骨関連遺伝子の発現をPCR法で確認し、検討した。今回、骨形成作用を細胞レベルで検討し、臨床応用へ向けた基礎的データを蓄積することを達成したと考えている。