光化学治療により誘導されるアポトーシス発現に対するHSP70の影響

点击翻译按钮获取中文摘要

1 癌細胞にHSP70を過剰発現させ、その発現をウェスタンブロット解析にて確認し、HSP70発現株を作成。HSP70が単独に発現するように構築したプラスミドをリポフェクション法にて細胞にトランスフェクションさせ、ウェスタンブロットにてHSP70が発現していることを確認できた。2 親株とHSP70発現株において、PDTに対する感受性を比較。またアポトーシス誘導率についても検討。NPe6(レザフィリン)を用いたPDTを親株とHSP70発現株に施した後、生存率を比較した。親株の生存率に比べると、HSP70発現株は生存率が高かった。アポトーシスの検出はヘキスト染色、フローサイトメトリーを用いて行った。両株ともアポトーシスの検出はできたが、親株のほうがアポトーシス誘導率は高かった。3 親株とHSP70発現株において、抗癌剤によって誘導されたアポトーシスの検出およびCaspaseの活性測定を行うCaspaseの活性測定は蛍光基質法を用いて行った。ここで、実際にHSP70が高発現している細胞においては、アポトーシス耐性機構が確立されていることを確認した。現在、HSP70発現株において、HSP70と結合しているタンパクをGST pull down assayにて分離し、HSP70と関連しているシグナル経路の同定を行っているところである。