歯根膜線維芽細胞におけるGDF-5の特異的機能とシグナル伝達機構の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

1.In vivoの歯根膜、腱におけるレセプター発現の調査:PDL-L2に多く発現し、Mc3T3-Elに発現が少なかったレセプターであるALK-1に着目した。In vivoでの発現状態の調査のために、ALK-1 DIG標識RNAプローブ用い、マウス歯周組織とアキレス腱の切片を用いin situ hybridizationを行ったところ、歯根膜にALK-1の発現が確認された。2.ALK-1レセプター発現状態が石灰化に及ぼす影響の調査:ALK1が石灰化に及ぼす影響を調査するためALK-1stable transfected PDL-L2,MC3T3E-1 cell lineを作製し、これらを用い石灰化実験を行ったところ、PDL-L2ALK-1(QA)stableとPDL-L2の長期培養による石灰化ノデュールの形成量の差はなく、MC ALK-1(QA) stableはMC3T3E-1より石灰化が亢進した。ALK-1は直接的な石灰化抑制作用を持たないことが推測された。3.GDF-5刺激時のSmad、p38、Erk、JNKのリン酸化とSmadの核内移行の調査:rmGDF-5,rhBMP-2,VehicleをPDL-L2に添加し、15分、30分後にTotal cell lyseteを抽出したもの用い、Erk、JNK、P38、Smadのリン酸化の変化をWestern blottingにより調査した。また、GDF-5,BMP-2刺激時のPDL-L2におけるSmadの核内移行を調査したところ、いずれもSmad1,5,8の核内移行が認められた。4.マイクロアレイによるGDF-5の未知標的遺伝子の検索:GDF-5の刺激でPDL-L2において発現量が上昇するがMC3T3-E1で不変もしくは減少する未知遺伝子・既知遺伝子をGene tipシステムにて検索、解析した。