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歯根膜線維芽細胞におけるGDF-5の特異的機能とシグナル伝達機構の解明

阐明GDF-5在牙周膜成纤维细胞中的特异性功能和信号转导机制

基本信息

批准号：
17791516
负责人：
飯澤二葉子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1.In vivoの歯根膜、腱におけるレセプター発現の調査:PDL-L2に多く発現し、Mc3T3-Elに発現が少なかったレセプターであるALK-1に着目した。In vivoでの発現状態の調査のために、ALK-1 DIG標識RNAプローブ用い、マウス歯周組織とアキレス腱の切片を用いin situ hybridizationを行ったところ、歯根膜にALK-1の発現が確認された。2.ALK-1レセプター発現状態が石灰化に及ぼす影響の調査:ALK1が石灰化に及ぼす影響を調査するためALK-1stable transfected PDL-L2,MC3T3E-1 cell lineを作製し、これらを用い石灰化実験を行ったところ、PDL-L2ALK-1(QA)stableとPDL-L2の長期培養による石灰化ノデュールの形成量の差はなく、MC ALK-1(QA) stableはMC3T3E-1より石灰化が亢進した。ALK-1は直接的な石灰化抑制作用を持たないことが推測された。3.GDF-5刺激時のSmad、p38、Erk、JNKのリン酸化とSmadの核内移行の調査:rmGDF-5,rhBMP-2,VehicleをPDL-L2に添加し、15分、30分後にTotal cell lyseteを抽出したもの用い、Erk、JNK、P38、Smadのリン酸化の変化をWestern blottingにより調査した。また、GDF-5,BMP-2刺激時のPDL-L2におけるSmadの核内移行を調査したところ、いずれもSmad1,5,8の核内移行が認められた。4.マイクロアレイによるGDF-5の未知標的遺伝子の検索:GDF-5の刺激でPDL-L2において発現量が上昇するがMC3T3-E1で不変もしくは減少する未知遺伝子・既知遺伝子をGene tipシステムにて検索、解析した。

The root membranes, tendons and tendons of the 1.In vivo show that there are many signs of PDL-L2 and that there is less of it in Mc3T3-El. The In vivo profile shows that the status is different, the ALK-1 DIG tag RNA is used, the tissue tissue is cut, the tendon is sliced with the in situ hybridization, and the root membrane is ALK-1 to confirm that the tendon is correct. The current status of 2.ALK-1 is calcinated and ALK1 is calcinated and ALK-1stable transfected PDL-L2 is affected. MC3T3E-1 cell line was used as a liming agent, and PDL-L2ALK-1 (QA) stable PDL-L2 was used for long-term training. The amount of liming was different and that of MC ALK-1 (QA) stableMC3T3E-1 was increased. The direct calcination inhibition of ALK-1 was found to be a direct inhibitor of liming. Smad, p38, Erk and JNK were acidified during 3.GDF-5 stimulation: rmGDF-5,rhBMP-2,Vehicle PDL-L2 was added, 15 minutes and 30 minutes later, Erk, JNK, p38, and Smad were extracted from rmGDF-5,rhBMP-2,Vehicle. Western blotting was acidified. During the stimulation of GDF-5,BMP-2 and GDF-5,BMP-2, the migration of Smad in the nucleus of PDL-L2 was induced, and the migration in the nucleus of Smad1,5,8 was induced. 4. The unknowns of the unknown GDF-5: GDF-5 stimulates the PDL-L2, the quantity, the MC3T3-E1, the unknown, the unknown, the known, the Gene tip, the cable, the analysis.