权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

真核生物DNAポリメラーゼα、δ、εによるG→Cトランスバージョンの可能性

真核 DNA 聚合酶 α、δ 和 ε 发生 G→C 转换的可能性

基本信息

批准号：
17710048
负责人：
喜納克仁
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokushima Bunri University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

グアニンの8位をブロモ化し、まずは8ブロモグアニンを合成した。その後、ナトリウムメトキシドで8メトキシグアニンを合成した。2位のアミノ基を保護し、5'位のヒドロキシ基をDMTrで保護後、アミダイト化剤を用いて、8メトキシグアニンのアミダイトを合成した。それをDNA合成機を用いて、8メトキシグアニンを16番目にいれた30merのDNAテンプレートを合成した。また同じ位置に8オキソグアニンを入れたDNAを別途購入した。8メトキシグアニンから光反応と加熱反応によりオキサゾロン入りオリゴマーを生成させ、HPLCにより2段階の精製を試みた。収率は1%強であった。グアニジノヒダントイン入りオリゴマーは8オキソグアニンからイリジウム酸化により生成させ、HPLCにより1段階の精製を試みた。収率は10%強であった。これら調製したDNAテンプレートに、RIラベルした15merのDNAプライマーとデオキシヌクレオチド3リン酸を1種類加え、DNAポリメラーゼγ、εやDpo4により取り込み反応を行った。その結果をポリアクリルアミドゲル電気泳動で解析した。1種類の塩基取り込みについては、シトシン以外の塩基を取り込むという結果が出た。しかしながら、ポリメラーゼの種類によっては、取り込まれる塩基の種類に違いが見られた。伸長反応については、同様の実験系にデオキシヌクレオチド3リン酸4種類全てを用いて行った。その結果、いくつかの塩基がとりこまれ、その後損傷を乗り越えてDNAが全長の長さまで伸長されることが判明した。このことにより、解析したDNA損傷は全て突然変異能をもつことが証明された。なお、RI施設は現大学RI施設を使用した。

The 8-bit switch is integrated into the 8-bit switch. After the game, the game will be completed. 2-bit protection, 5-bit protection, 8-bit protection, 8-bit protection The DNA fusion machine is used in 16 different ways, including 30mer DNA fusion. The same position is required for the purchase of DNA 8. The purification process of HPLC was carried out in 2 stages. The rate is 1%. 8 ° C, 8 ° C, 9 ° C, 9 ° C, 10 ° C, 10 °10% of the time. This is the first time that the DNA has been modified. The DNA has been modified. The DNA has been modified. The results of this study are as follows: 1 Type of base selection: In the case of the case of Elongation reaction, the same kind of implementation system, three kinds of acid, all kinds of use. As a result, the length of DNA is longer than the length of DNA. The DNA damage was completely unexpected. RI facilities are now used by universities.