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真核生物DNAポリメラーゼα、δ、εによるG→Cトランスバージョンの可能性

真核 DNA 聚合酶 α、δ 和 ε 发生 G→C 转换的可能性

基本信息

批准号：
17710048
负责人：
喜納克仁
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokushima Bunri University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

グアニンの8位をブロモ化し、まずは8ブロモグアニンを合成した。その後、ナトリウムメトキシドで8メトキシグアニンを合成した。2位のアミノ基を保護し、5'位のヒドロキシ基をDMTrで保護後、アミダイト化剤を用いて、8メトキシグアニンのアミダイトを合成した。それをDNA合成機を用いて、8メトキシグアニンを16番目にいれた30merのDNAテンプレートを合成した。また同じ位置に8オキソグアニンを入れたDNAを別途購入した。8メトキシグアニンから光反応と加熱反応によりオキサゾロン入りオリゴマーを生成させ、HPLCにより2段階の精製を試みた。収率は1%強であった。グアニジノヒダントイン入りオリゴマーは8オキソグアニンからイリジウム酸化により生成させ、HPLCにより1段階の精製を試みた。収率は10%強であった。これら調製したDNAテンプレートに、RIラベルした15merのDNAプライマーとデオキシヌクレオチド3リン酸を1種類加え、DNAポリメラーゼγ、εやDpo4により取り込み反応を行った。その結果をポリアクリルアミドゲル電気泳動で解析した。1種類の塩基取り込みについては、シトシン以外の塩基を取り込むという結果が出た。しかしながら、ポリメラーゼの種類によっては、取り込まれる塩基の種類に違いが見られた。伸長反応については、同様の実験系にデオキシヌクレオチド3リン酸4種類全てを用いて行った。その結果、いくつかの塩基がとりこまれ、その後損傷を乗り越えてDNAが全長の長さまで伸長されることが判明した。このことにより、解析したDNA損傷は全て突然変異能をもつことが証明された。なお、RI施設は現大学RI施設を使用した。

This is an 8-bit compound that can be synthesized. After that, I don't know what to do. I don't know. I don't know. I don't know. After 2-bit protection, 5'- bit protection, DMTr protection, 8-bit, 8-bit, 8-bit, 1-bit, 2-bit, 5-bit, 8-bit, 10-bit, 8-bit, 8-bit, 10-bit, 10-bit, 2-bit, 5'- bit, 8-bit, 10-bit, 8-bit, 10-bit, 10-bit, 5-bit, 2-bit, 5'- bit, The DNA synthesis machine is designed to use the 30mer DNA synthesis machine to synthesize the product. This is the same location. 8. Please enter the DNA. 8. Do not change the light response. Do not change the data. The data will be generated. In the HPLC section 2, you will need to complete the test. The rate is more than 1%. This is the first step in the process of acidizing. This is the first step in the process of acidification, and the first paragraph of the HPLC is required to complete the test. The rate is 10% higher than 10%. Do not cause DNA to change, RI to 15mer or DNA to change, and to change the amount of acid in 3 to add one type, DNA to check gamma, and Dpo4 to check the number of negative lines. The results showed that the electrophoretic activity analysis was performed. The main results are as follows: (1) based on the basic data, the results show that the results are not correct. We need to know how to do this, how to do something about it, and what to do about it. It is necessary to extend the anti-drug trade, the same as the other two, and the same as the other four kinds of all-purpose products, such as 3-carboxylic acid and so on. The results of the test, the results of the test, the results of the results, the results and the results. All of a sudden, all of a sudden, you can tell the truth. You can tell the truth. You can tell the truth. The construction of RI has made it possible to use the equipment of RI in universities.