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Preclinical Study for Hemophilia Gene and Cell Therapy in Model Mice and in Non-human Primates

模型小鼠和非人灵长类动物血友病基因和细胞治疗的临床前研究

基本信息

批准号：
18591084
负责人：
MIMURO Jun
金额：
$ 2.49万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

Hemophilia is an X-linked inherited bleeding disorder caused by mutations in the factor VIII (FVIII) gene or the factor IX (FIX) gene which in turn create deficiency of FVIII or FIX. Gene therapy for hemophilia is studied in mice and in macaques. High and long term expression of canine FVIII without immune suppression was achieved with the AAV8 vector carrying the canine FVIII gene under the control of the liver specific HCR/α1-antitrypsin enhancer/promoter complex in hemophilia A mice, suggesting that immune tolerance to FVIII can be achieved with specific expression of FVIII in the liver. Because of the short half-life of human FVIII in the mouse circulation and neutralizing antibody formation to human FVIII, it had been difficult to express human FVIII at the therapeutic level in hemophilia A mice. We could express human FVIII at the therapeutic level in hemophilia A mice with administration of the AAV8 vector carrying the human FVIII gene under control of the liver specific HCR/α1- … More antitrypsin enhancer/promoter complex. Transplantation of hematpoietic stem cells transduced with the SIV vector carrying the FVIII gene under control of the GPIbα promoter in hemophilia A mice resulted in platelet-specific expression of FVIII that rescued hemophilia A mice from bleeding upon tail clipping. The similar approach to express FVII in the activated form (FVIIa) could also rescue hemophilia A mice from bleeding upon tail clipping even in the presence of neutralizing antibody to FVIII, suggesting that the platelet-specific expression of coagulation factors can be a genetic therapy for bleeding disorders. AAV vectors serotypes 1, 8, and 9 had been shown to express FIX at the therapeutic levels and even at the super normal levels in mice. A preclinical study of gene therapy for hemophilia B was conducted using macaques. The AAV vector serotypes 1, 8, and 9 carrying the macaque FIX gene that could express mutant macaque FIX T262A, which could be quantified by the human FIX specific monoclonal antibody, were administered into macaques and expression of mutant FIX T262A was studied. The therapeutic levels of FIX persisted in all AAV1 vector-injected macaques, one macaque of serotype AAV8 vector-injected group, and one macaque of AAV9 vector-injected group for one year without adverse effect. However, expression of macaque FIX T262A in other macaques with AAV8 or AAV9 vector injection did not reach the therapeutic levels. Presence of pre-existing neutralizing antibody against wild-type AAV was thought to function inhibitory to AAV vector-mediated gene transfer. These data suggested that AAV vector-mediated gene transfer to the muscle and to the liver is a safe and promising genetic therapy for hemophilia. Less

血友病是一种X连锁遗传性出血性疾病，由因子VIII（FVIII）基因或因子IX（FIX）基因突变引起，进而导致FVIII或FIX缺乏。血友病的基因治疗在小鼠和猕猴中进行了研究。在血友病A小鼠中，使用携带在肝脏特异性HCR/α1-抗胰蛋白酶增强子/启动子复合物控制下的犬FVIII基因的AAV 8载体实现了犬FVIII的高和长期表达而没有免疫抑制，这表明可以通过在肝脏中特异性表达FVIII来实现对FVIII的免疫耐受。由于人FVIII在小鼠循环中的半衰期短以及针对人FVIII的中和抗体形成，因此难以在血友病A小鼠中以治疗水平表达人FVIII。我们可以在血友病A小鼠中以治疗水平表达人FVIII，其中施用携带人FVIII基因的AAV 8载体，该载体在肝脏特异性HCR/α1-HCR的控制下， ...更多信息抗胰蛋白酶增强子/启动子复合物。在血友病A小鼠中移植用携带受GPIbα启动子控制的FVIII基因的SIV载体转导的造血干细胞，导致FVIII的血小板特异性表达，从而使血友病A小鼠免于剪尾后出血。表达活化形式的FVII（FVIIa）的类似方法也可以在剪尾后挽救血友病A小鼠免于出血，即使在存在FVIII的中和抗体的情况下，这表明凝血因子的血小板特异性表达可以是出血性疾病的遗传疗法。已显示AAV载体血清型1、8和9在小鼠中以治疗水平甚至以超正常水平表达FIX。使用猕猴进行血友病B基因治疗的临床前研究。将携带猕猴FIX基因的AAV载体血清型1、8和9给予猕猴，并研究了突变型FIX T262 A的表达，所述猕猴FIX基因可表达突变型猕猴FIX T262 A，所述突变型猕猴FIX T262 A可通过人FIX特异性单克隆抗体定量。FIX的治疗水平在所有AAV 1载体注射猕猴、血清型AAV 8载体注射组的一只猕猴和AAV 9载体注射组的一只猕猴中持续1年，没有不良反应。然而，用AAV 8或AAV 9载体注射的其它猕猴中猕猴FIX T262 A的表达未达到治疗水平。预先存在的针对野生型AAV的中和抗体的存在被认为对AAV载体介导的基因转移起抑制作用。这些数据表明，AAV载体介导的基因转移到肌肉和肝脏是一种安全和有前途的血友病基因治疗。少

项目成果

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科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Silencing of a targeted protein in in vivo platelets using a lentiviral vector delivering short hairpin RNA sequence.

使用传递短发夹 RNA 序列的慢病毒载体沉默体内血小板中的靶蛋白。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27
影响因子：
0
作者：
Ohmori T;Kashiwakura Y;Ishiwata A;Madoiwa S;Mimuro J;Sakata Y.
通讯作者：
Sakata Y.

肝臓特異的にFVIII を高発現するAAV8 ベクターを用いた血友病A マウスへのFVIII 遺伝子導入

使用 AAV8 载体将 FVIII 基因引入 A 型血友病小鼠，该载体以肝脏特异性方式高度表达 FVIII

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
石渡彰;三室淳;柏倉裕志;大森司;諏合輝子;窓岩清治;水上浩明;久米晃啓;小澤敬也;坂田洋一
通讯作者：
坂田洋一

Silencing of atargeted protein in invivo platelets using a lentiviral vector delivering short hairpin RNA sequenc

使用传递短发夹 RNA 序列的慢病毒载体沉默体内血小板中的靶向蛋白

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Arterioscler Thromb Vasc Biol 27(10)
影响因子：
0
作者：
東原正明;他;Ohmori T
通讯作者：
Ohmori T

敗血症性DIC患者における ADAMTS 13欠乏と臓器障害

脓毒症 DIC 患者的 ADAMTS 13 缺乏和器官功能障碍

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tamaru J. I.;et. al.;Madoiwa S;鈴木律朗;Ohmori T;鈴木律朗;Suzuki T;高野勝弘;一迫玲・鈴木律朗・竹内賢吾;Kunishima S;石渡彰;Murase T. et al.;Narimatsu H. et al.;水上浩明;Inamoto Y. et al.;Kunishima S;石渡彰;Li C.et al.;Kunishima S;小野智子
通讯作者：
小野智子

A classification of the fibrin network structures formed from the hereditary dysfibrinogens