水疱性類天疱瘡病的抗原に対するヒト型モノクローナル抗体の作成と治療への応用

抗大疱性类天疱疮致病抗原的人单克隆抗体的制备及其治疗应用

• 批准号: 18591230
• 负责人: 王 剛
• 金额: $ 2.53万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18591230/
• 关键词: 皮膚病理学; 免疫; 治療; 臨床; 細胞・組織

本研究では、自己免疫疾患の新規治療法として、最も頻度の高い自己免疫性皮膚疾患である水疱性類天疱瘡(BP)をターゲット疾患とし、BP患者末梢血より阻害型ヒトモノクローナルFab抗体をより迅速に作成する。平成18年度は、本研究ヘエントリーするBP患者の選択、末梢血、血清の解析を行い、選択された患者から末梢血単核球を採取し、mRNAを抽出、cDNAレパトアを作成、ファージ抗体ライブラリーの作成を行った。高力価の自己抗体を有するBP患者2名から採取した末梢血から自己抗体産生B細胞を含む単核球を得た。得られた単核球からmRNAを抽出した後、PCRにてIgGのFab領域に対応する領域を増幅して抗体cDNAライブラリーを作製した。p3MHベクターにクローニングした後、大腸菌に感染させて、ファージ抗体ライブラリーを作製した。作成したファージ抗体ライブラリーを、組み換えヒトNC16Aを固相化したプレートを用いたパンニング法にてポジティブファージクローンを回収した。パンニングを2〜4度繰り返し、組み換えヒトNC16Aに対する抗原特異性の高いファージ抗体クローンを選択した。得られたファージ抗体クローンから制限酵素を用いてgeneIII領域を除去、セルフライゲーションした後に大腸菌に形質転換し、上清中に溶出したFab抗体を遠心分離にて回収した。得られたFab抗体を、組み換えヒトNC16A1-3蛋白質、組み換えヒトNC16A1蛋白質、組み換えヒトNC16A2蛋白質、組み換えヒトNC16A2.5蛋白質及び組み換えヒトNC16A3蛋白質が固相化されたプレートを用いて、HRP標識抗ヒトλ鎖抗体あるいはHRP標識抗ヒトκ鎖抗体を用いたELISA法により、エピトープマッピングを行った。その結果、NC16A2とNC16A2.5に対し反応性が高いことが判明した。

This study で は, their immune disorders の new rules therapy と し て, most も high frequency の い own autoimmune skin disease で あ る vesiculobullous pemphigoid (BP) を タ ー ゲ ッ ト disorders と よ し, BP in patients with peripheral blood type り resistance against ヒ ト モ ノ ク ロ ー ナ ル Fab antibody を よ り に done quickly す る. 18 year は pp.47-53, this study ヘ エ ン ト リ ー す る BP patients の sentaku, peripheral blood, serum の analytic を い, sentaku さ れ た patients か ら peripheral blood 単 nuclear ball を take し, mRNA を extraction, cDNA レ パ ト ア, フ を ァ ー ジ antibody ラ イ ブ ラ リ ー の made line を っ た. Colliers 価 の ourselves antibody を す る 2 patients with BP か ら take し た peripheral blood か ら own antibodies produce B cells を containing む 単 nuclear ball を た. Have ら れ た 単 nuclear ball か ら mRNA を spare し た, PCR after に て IgG の Fab field に 応 seaborne す る field を rights of し て antibody cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. P3MH ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し た, coliform に infection after さ せ て, フ ァ ー ジ antibody ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. Made し た フ ァ ー ジ antibody ラ イ ブ ラ リ ー を, group み in え ヒ ト NC16A を solid phase change し た プ レ ー ト を with い た パ ン ニ ン グ method に て ポ ジ テ ィ ブ フ ァ ー ジ ク ロ ー ン を back 収 し た. 2 ~ 4 degrees パ ン ニ ン グ を Qiao り return し, group み in え ヒ ト NC16A に す seaborne る antigen specificity high の い フ ァ ー ジ antibody ク ロ ー ン を sentaku し た. Have ら れ た フ ァ ー ジ antibody ク ロ ー ン か ら を limited enzyme with い て geneIII を removed, セ ル フ ラ イ ゲ ー シ ョ ン し た after に coliform に form quality planning in し, supernatant に dissolution し た Fab antibody を telecentric separation に て back 収 し た. Antibodies to ら れ た Fab を, group み in え ヒ ト NC16A1-3 protein change, group み え ヒ ト み NC16A1 protein, group in え ヒ ト み NC16A2 protein, group in え ヒ ト NC16A2. 5 protein and び み in え ヒ ト NC16A3 protein が solid phase change さ れ た プ レ ー ト を with い て, HRP identification anti ヒ ト lambda Lock antibody あ る い は HRP identity resistance ヒ ト kappa lock antibody を predominate with い た ELISA method に よ り, エ ピ ト ー プ マ ッ ピ ン グ を line っ た. The そ そ result, NC16A2と nc16a2.5 に against <s:1> anti応 が high <s:1> とが とが とが determination た.

项目成果

ポリペプチドを有効成分とする自己免疫性皮膚疾患治療薬

以多肽为活性成分的自身免疫性皮肤病治疗方法

• 发表时间: 2007