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甲状腺ホルモンによるキナーゼカスケード活性化の生理的意義

甲状腺激素激活激酶级联的生理意义

基本信息

批准号：
18799004
负责人：
曹霞
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト皮膚繊維芽細胞で同定したT3応答遺伝子RCAN2の発現機序を解析する過程で、我々は、T3がTRを介して、PI3K、Akt、mTOR、p70S6kinaseからなるキナーゼカスケードを活性化する新規作用を見出した。そこで、この作用の神経系における生理的意義を検討した。TRαを構成的に発現させたNeuro2a/TRα細胞においても、T3はTR、PI3Kを介してAktを活性化し、pro-apoptotic蛋白であるBadやGSK3βを抑制した。実際、T3は持続的なAkt活性化を介して血清除去によるNeuro2a/TRα細胞のアポトーシスを抑制した。次に、マウス大脳皮質スライスを用いて免疫組織染色法で検討すると、T3はやはりAkt活性化を介してcortical plateやintermediate zoneに存在する神経細胞に対して抗アポトーシス作用を発揮することが示された。T3によるPI3K活性化機序を明らかにする目的で、PI3Kの調節サブユニットp85αとTRαとの結合をGST-pull down法を用いて検討した。TRαはT3結合ドメインを介してp85αのSH2ドメインを含むC端側領域と結合した。更に、TRαを過剰発現する細胞において、T3はTRαとp85αの結合を増強するとともに、TRαとsrcの結合を増加し、srcを活性化した。以上のT3作用は、TRを介するがTRによる遺伝子発現調節を伴わない、いわゆるnon-genomic作用である。PI3K-Aktカスケードは成長因子によっても活性化され、細胞の増殖・生存や蛋白合成を調節する重要な制御系であり、T3はこうした系を直接制御することが明らかになった。T3によるPI3K活性化には、TR、p85α、p110、src、rasなどが高次複合体を形成し関与している可能性が示唆された。

でヒト skin 繊 d bud cells might be した T3 応 a heritage 伝 son RCAN2 の発 now machine sequence analytical すをでる process, I 々は, T3 が TR を dielectric して, PI3K, and Akt, mTOR, p70S6kinase からなるキナーゼカスケードを activeness する out new rules role をした. Youdaoplaceholder0 そでで, the function of the neurotic system における the physiological significance を検 discussion on た. TR of alpha をに発 now させた Neuro2a/TR alpha cells においても, T3 は TR, PI3K を interface して Akt を activeness し, pro - apoptotic protein である Bad や GSK3 beta を inhibit した. Be international, T3 は hold 続な Akt activation を interface して serum remove による Neuro2a/TR alpha cells のアポトーシスを inhibit した. に, マウス big 脳 cortex スライスを with いて immunohistochemical staining です検 please ると, T3 はやはり Akt activation を interface して cortical plate や intermediate zone に exist する god 経 cells にし seaborne て resistance アポトーシス role を発 swing することが shown された. T3 による PI3K active mechanism for sequence を Ming らかにする purpose で, PI3K の regulating サブユニット p85 alpha と TR alpha とのをを GST - pull down method with いて beg し検た. TRα <s:1> T3 binds to ドメ <s:1> をを, <s:1> て, p85α <s:1> SH2ドメ <s:1> ををを contains む c-terminal side domain と binding to たた. More に, TR alpha を turning 発 now する cells において, T3 は TR alpha と p85 alpha の combining を raised strong するとともに, TR alpha と SRC の combining を raised し, SRC を activeness した. Above の T3 は, TR を interface するが TR による posthumous son 伝発 now adjust を with わない, いわゆる non - function genomic である. PI3K - Akt カスケードは growth factor によっても activeness されや protein synthesis, cell の raised colonization survival を adjust する important な suppression system であり, T3 はこうしをた department direct suppression することが Ming らかになった. T3 による PI3K activeness には, TR and p85 alpha, p110, SRC, ras などが high order complex を form し masato and していがる possibility in stopping された.