腫瘍溶解能と腫瘍特異的感染能を持つ弱毒化麻疹ウイルスによる肺癌標的治療法の開発

使用具有溶瘤和肿瘤特异性感染力的减毒麻疹病毒开发肺癌靶向治疗

• 批准号: 18799009
• 负责人: 中村 貴史
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo (2007)Kyushu University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18799009/
• 关键词: ウイルス; 癌; トランスレーショナルリサーチ; バイオテクノロジー

本研究では、従来のウイルスベクターでは不可能であったspecificとsystemicの両方の効果を併せ持つ弱毒化麻疹ウイルスベクターを開発してきた。より強力な抗腫瘍効果を発揮するウイルスの開発のため、ウイルスの感染・増殖に伴って治療効果を持つ2種類の血管新生阻害蛋白、及び免疫系を刺激する蛋白を発現する組換え弱毒化麻疹ウイルスを作成した。これらの蛋白は、既にin vitro及びin vivoにおける抗腫瘍効果が証明されており、その臨床応用がなされている。血管新生阻害蛋白であるマウスのエンドスタチン、及びヒトのツマスタチン(マウスでも同様の効果を発揮する)をコードするcDNAは、感染細胞で発現した蛋白が細胞から放出するように、pBLASTベクターのヒトIL2 signal seauenceの分泌シグナル下、又はpSecTag2ベクターのマウスIgκ鎖の分泌シグナル下にクローニングした。この分泌シグナルから血管新生阻害蛋白までを増幅したPCR産物を、麻疹ウイルスゲノムプラスミドに挿入した。一方、免疫系を刺激するマウスの顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子をコードするcDNAも、上記と同様にウイルスゲノムに挿入した。これまで開発してきたスターシステムによって、上記の外来遺伝子を発現する組換え麻疹ウイルスを作成した。組換え麻疹ウイルスから放出されたツマスタチンは、マトリゲルとヒト静脈血管内皮細胞(Huvec細胞)を使った血管新生のin vitroモデルにおいて、血管阻害効果を発揮することを確認した。次に、A549ヒト肺癌細胞株をSCIDマウスの腹側の皮下に移植し、腫瘍直径が約0.5cmに到達した時、10^6Spfuの組換え麻疹ウイルスを投与した。GFP発現コントロールウイルスとツマスタチン発現ウイルスの抗腫瘍効果には差がなかったことより、ウイルスの投与量と投与回数を増やす検討が必要となった。

This study で は, 従 の ウ イ ル ス ベ ク タ ー で は impossible で あ っ た specific と systemic の struck party の unseen fruit を and せ つ weak poison measles ウ イ ル ス ベ ク タ ー を open 発 し て き た. よ り resistance strong な swollen sores unseen fruit を 発 swing す る ウ イ ル ス の open 発 の た め, ウ イ ル ス の に associated with infection, raised colonization っ て treatment services fruit を hold 2 kinds の つ angiogenesis inhibitor against proteins, and immune system を び stimulation す る protein を 発 now す る group in え weak poison measles ウ イ ル ス を made し た. こ れ ら の protein は, に both in vitro and び in vivo に お け る resistance swollen sores unseen fruit が prove さ れ て お り, そ の clinical 応 が な さ れ て い る. Angiogenesis inhibitor against protein で あ る マ ウ ス の エ ン ド ス タ チ ン and び ヒ ト の ツ マ ス タ チ ン (マ ウ ス で も with others の unseen fruit を 発 swing す る) を コ ー ド す る cDNA は, infected cells で 発 now し た protein が cell か ら release す る よ う に, pBLAST ベ ク タ ー の ヒ ト IL2 signal Under the secretion of seauence の シ グ ナ ル and は pSecTag2 ベ ク タ ー の マ ウ ス Ig kappa lock predominate の secretion シ グ ナ ル under に ク ロ ー ニ ン グ し た. こ の secretion シ グ ナ ル か ら angiogenesis inhibitor against protein ま で を rights of し を た PCR products, measles ウ イ ル ス ゲ ノ ム プ ラ ス ミ ド に scions into し た. One party, the immune system を stimulus す る マ ウ ス の particles ball, マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー stimulating factor を コ ー ド す る cDNA も, written と with others に ウ イ ル ス ゲ ノ ム に scions into し た. こ れ ま で open 発 し て き た ス タ ー シ ス テ ム に よ っ て, written の foreign heritage 伝 son を 発 now す る group in え measles ウ イ ル ス を made し た. Group in え measles ウ イ ル ス か ら release さ れ た ツ マ ス タ チ ン は, マ ト リ ゲ ル と ヒ ト venous vascular endothelial cells (Huvec) を っ た angiogenesis の in vitro モ デ ル に お い て, vascular resistance against unseen fruit を 発 swing す る こ と を confirm し た. に, A549 ヒ ト lung cancer cell lines を SCID マ ウ ス の ventral の し subcutaneous に transplantation, swollen sores diameter is about 0.5 cm に が reach し た, 10 ^ 6 spfu の group in え measles ウ イ ル ス を cast with し た. GFP 発 now コ ン ト ロ ー ル ウ イ ル ス と ツ マ ス タ チ ン 発 now ウ イ ル ス の resistance swollen sores unseen fruit に は poor が な か っ た こ と よ り, ウ イ ル ス の と cast cast and quantity and the back number を raised や す beg が 検 necessary と な っ た.

项目成果

Affinity threholds for membrane fusion triggering by viral glycoproteins.

病毒糖蛋白触发膜融合的亲和力阈值。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Virology 81
• 作者: Hasegawa K;Hu C;Nakamura T;Marks JD;Russell SJ;Peng KW.
• 通讯作者: Peng KW.

腫瘍標的ウイルスベクターによる癌治療

使用肿瘤靶向病毒载体治疗癌症

• 发表时间: 2007
• 作者: Wei J;Wahl J;Nakamura T;Stiller D;Mertens T;Hampl W;Debatin KM;Beltinger;中村貴史
• 通讯作者: 中村貴史

Chapter of Molecular targeting in oncology : Engineering Oncolytic Measles Viruses for Targeted Cancer Therapy.

肿瘤学分子靶向章节：工程溶瘤麻疹病毒用于靶向癌症治疗。

• 发表时间: 2008
• 作者: Nakamura T;Russell SJ
• 通讯作者: Russell SJ