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腫瘍溶解能と腫瘍特異的感染能を持つ弱毒化麻疹ウイルスによる肺癌標的治療法の開発

使用具有溶瘤和肿瘤特异性感染力的减毒麻疹病毒开发肺癌靶向治疗

基本信息

批准号：
18799009
负责人：
中村貴史
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo (2007)Kyushu University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、従来のウイルスベクターでは不可能であったspecificとsystemicの両方の効果を併せ持つ弱毒化麻疹ウイルスベクターを開発してきた。より強力な抗腫瘍効果を発揮するウイルスの開発のため、ウイルスの感染・増殖に伴って治療効果を持つ2種類の血管新生阻害蛋白、及び免疫系を刺激する蛋白を発現する組換え弱毒化麻疹ウイルスを作成した。これらの蛋白は、既にin vitro及びin vivoにおける抗腫瘍効果が証明されており、その臨床応用がなされている。血管新生阻害蛋白であるマウスのエンドスタチン、及びヒトのツマスタチン(マウスでも同様の効果を発揮する)をコードするcDNAは、感染細胞で発現した蛋白が細胞から放出するように、pBLASTベクターのヒトIL2 signal seauenceの分泌シグナル下、又はpSecTag2ベクターのマウスIgκ鎖の分泌シグナル下にクローニングした。この分泌シグナルから血管新生阻害蛋白までを増幅したPCR産物を、麻疹ウイルスゲノムプラスミドに挿入した。一方、免疫系を刺激するマウスの顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子をコードするcDNAも、上記と同様にウイルスゲノムに挿入した。これまで開発してきたスターシステムによって、上記の外来遺伝子を発現する組換え麻疹ウイルスを作成した。組換え麻疹ウイルスから放出されたツマスタチンは、マトリゲルとヒト静脈血管内皮細胞(Huvec細胞)を使った血管新生のin vitroモデルにおいて、血管阻害効果を発揮することを確認した。次に、A549ヒト肺癌細胞株をSCIDマウスの腹側の皮下に移植し、腫瘍直径が約0.5cmに到達した時、10^6Spfuの組換え麻疹ウイルスを投与した。GFP発現コントロールウイルスとツマスタチン発現ウイルスの抗腫瘍効果には差がなかったことより、ウイルスの投与量と投与回数を増やす検討が必要となった。

This research is not possible because it is not specific. The effect of stemic's prescription is to reduce the toxicity of measles and reduce the toxicity of measles.よりPowerful anti-tumor effectを発 WAIするウイルスの开発のため、ウイルスのinfection・proliferationに与ってtreatment effectをlastingつIt is a combination of two types of angiogenesis-inhibiting protein and an immune system stimulating protein, which is an attenuated measles protein. The anti-tumor effect of これらのprotein has been proven in vitro and in vivo, and the そのclinical use has been proven. Angiogenesis-inhibiting proteinヒトのツマスタチン(マウスでも同様の Effect を発向する)をコードするcDNAは, infected cells で発appears したprotein がcell からrelease するように, pBLAST ベクターのヒトIL2 Signal seauenceのsecretionシグナル下, and also pSecTag2ベクターのマウスIgκ lockのsecretionシグナル下にクローニングした.このSecret angiogenesis inhibitory protein までをamplification したPCR product を, measles ウイルスゲノムプラスミドにinsert した. On the one hand, the immune system is stimulated by the particle ball・マクロファージコロニーstimulation Factor をコードするcDNAも、Shangji と同様にウイルスゲノムにINSERT した.これまで开発してきたスターシステムによって、上记のThe foreign remnants of the disease are now replaced by measles, and the products are made. The group replaces the measles virus and releases the human venous endothelial cells (Huvec cells) to promote angiogenesis. The in vitro test is effective, and the blood vessel blocking effect is confirmed by the test. When the A549 lung cancer cell line SCID was subcutaneously transplanted into the ventral side, the diameter of the tumor was about 0.5cm, and when it reached the target, the 10^6 Spfu group was replaced by the measles test. The anti-swelling effect of GFP is not goodがなかったことより, ウイルスのinvestment amount, investment and number of times, necessary and necessary となった.