腫瘍溶解能と腫瘍特異的感染能を持つ弱毒化麻疹ウイルスによる肺癌標的治療法の開発

使用具有溶瘤和肿瘤特异性感染力的减毒麻疹病毒开发肺癌靶向治疗

基本信息

批准号：
18799009
负责人：
中村貴史
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo (2007)Kyushu University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、従来のウイルスベクターでは不可能であったspecificとsystemicの両方の効果を併せ持つ弱毒化麻疹ウイルスベクターを開発してきた。より強力な抗腫瘍効果を発揮するウイルスの開発のため、ウイルスの感染・増殖に伴って治療効果を持つ2種類の血管新生阻害蛋白、及び免疫系を刺激する蛋白を発現する組換え弱毒化麻疹ウイルスを作成した。これらの蛋白は、既にin vitro及びin vivoにおける抗腫瘍効果が証明されており、その臨床応用がなされている。血管新生阻害蛋白であるマウスのエンドスタチン、及びヒトのツマスタチン(マウスでも同様の効果を発揮する)をコードするcDNAは、感染細胞で発現した蛋白が細胞から放出するように、pBLASTベクターのヒトIL2 signal seauenceの分泌シグナル下、又はpSecTag2ベクターのマウスIgκ鎖の分泌シグナル下にクローニングした。この分泌シグナルから血管新生阻害蛋白までを増幅したPCR産物を、麻疹ウイルスゲノムプラスミドに挿入した。一方、免疫系を刺激するマウスの顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子をコードするcDNAも、上記と同様にウイルスゲノムに挿入した。これまで開発してきたスターシステムによって、上記の外来遺伝子を発現する組換え麻疹ウイルスを作成した。組換え麻疹ウイルスから放出されたツマスタチンは、マトリゲルとヒト静脈血管内皮細胞(Huvec細胞)を使った血管新生のin vitroモデルにおいて、血管阻害効果を発揮することを確認した。次に、A549ヒト肺癌細胞株をSCIDマウスの腹側の皮下に移植し、腫瘍直径が約0.5cmに到達した時、10^6Spfuの組換え麻疹ウイルスを投与した。GFP発現コントロールウイルスとツマスタチン発現ウイルスの抗腫瘍効果には差がなかったことより、ウイルスの投与量と投与回数を増やす検討が必要となった。

在这项研究中，我们开发了一种衰减的麻疹病毒载体，该病毒载体结合了特定和全身性的影响，而常规病毒载体则是不可能的。为了开发一种具有更有效抗肿瘤作用的病毒，我们创建了一种重组减弱的麻疹病毒，该病毒表达了两种类型的血管生成抑制剂蛋白，这些抑制剂对病毒的感染和增殖具有治疗作用，并刺激免疫系统。这些蛋白质已经在体外和体内证明了抗肿瘤作用，并且已在临床上应用。在PBLAST载体中人类IL2信号SEAUS的分泌信号下克隆了编码小鼠内抑素，血管生成抑制剂蛋白和人thumastatin（在小鼠中产生相似作用）的cDNA，或在Psectag2载体的分泌信号或Psectag2载体的小鼠IGκ链中的分泌信号，从而释放出蛋白质细胞中的细胞中释放出来。 PCR产物将分泌信号放大为血管生成抑制剂蛋白，被插入麻疹病毒基因组质粒中。另一方面，编码刺激免疫系统的小鼠粒细胞和巨噬细胞刺激因子的cDNA也以与上述相同的方式插入了病毒基因组中。使用到现在已经开发的星系，创建了一种表达上述外源基因的重组麻疹病毒。据证实，使用基质和人类静脉内皮细胞（HUVEC细胞），在重组麻疹病毒中释放的肿瘤蛋白在血管生成的体外血管生成模型中发挥血管抑制作用。然后将A549人肺癌细胞皮下植入SCID小鼠中，当肿瘤直径达到约0.5 cm时，重组麻疹病毒为10^6 SPFU。表达GFP的控制病毒和表达肿瘤的病毒的抗肿瘤作用没有差异，有必要考虑增加病毒的剂量和剂量和数量。