ヒト・メチレン葉酸還元酵素のリン酸化に関与する因子の検索

寻找参与人亚甲基叶酸还原酶磷酸化的因素

• 批准号: 18870005
• 负责人: 山田 和弘
• 金额: $ 1.74万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18870005/
• 关键词: 酵素; 栄養学

平成18年度科学研究費補助金交付期間中、ヒト・メチレン葉酸還元酵素(MTHFR)のリン酸化に関与する酵素を検索する端緒として、以下のような知見を得たので報告する。リン酸化はkinaseによって行われるので、本研究では、MTHFRとkinaseのタンパク質・タンパク質相互作用が鍵である。しかし、このような相互作用における分子間の結合は一過的であり、何らかの工夫が必要になる。そこで、MTHFRに化学修飾を施し、目的タンパク質と安定な結合を形成させることでこの問題を解決しようと試みた。はじめに精製MTHFR(全長、〜78kDa)に化学修飾を試みたが、修飾される部位の特定が困難であり、本研究には特異的にkinaseと相互作用するMTHFR中のアミノ酸配列の特定が必要であると考えた。このような場合、リン酸化部位(すなわち基質となる部位)が候補となる。しかし、MTHFRをリン酸化には、リン酸化部位から約300アミノ酸離れたリンカーの認識が重要であることを明らかにした。具体的には、Pro343-Pro355のアミノ酸配列が必須である。この部分を持つMTHFRは部分的(約50%)に修飾され、酵素活性を検出することができる。この部分以外にMTHFRのリン酸化に関与するアミノ酸配列はリンカー中に観察されなかった。このPro343-Pro355は、プロリン残基の他に疎水性アミノ酸と塩基性アミノ酸に富む領域である。そこで部位特異的変異体を作成しリン酸化状態を観察したが、リン酸化に関与するアミノ酸残基の特定には至らなかった。次に、Pro343-Pro355を含むリンカー中アミノ酸配列を参考にし、ペプチドを合成した。この合成ペプチドを化学修飾し、ラベルトランスファー法をもちいて相互作用するタンパク質の検索を行った。その結果、昆虫細胞粗抽出液中にいくつかの特異的なシグナルを検出した。現在、このタンパク質の同定を行っている。

Pp.47-53 18 annual scientific research fee subsidy during delivery, ヒ ト · メ チ レ ン folic acid also yuan enzyme (MTHFR) の リ ン acidification に masato and す る enzyme を 検 cable す る clue と し て, the following の よ う な knowledge を must た の report で す る. リ ン acidification は kinase に よ っ て line わ れ る の で, this study で は, MTHFR と kinase の タ ン パ ク qualitative · タ ン パ ク qualitative interaction が key で あ る. The ような interaction of <s:1>, <s:1>, ような, における, intermolecular <s:1> binding, であ,, and the ら time が necessary になる. そ こ で, MTHFR に chemically modified を し, purpose タ ン パ ク combines qualitative と stability な を form さ せ る こ と で こ の を solve し よ う と try み た. は じ め に refined MTHFR (full length, and 78 kda) に chemically modified を try み た が, modified さ れ る parts の specific が difficult で あ り, this study に は specific に kinase と interaction す る of MTHFR の ア ミ ノ acid with column の specific が necessary で あ る と exam え た. <s:1> ような occasion, リ <s:1> acidified site (すなわち matrix となる site)が candidate となる. し か し, MTHFR を リ ン acidification に は, リ ン acidification parts か ら about 300 ア ミ ノ acid from れ た リ ン カ ー の know が important で あ る こ と を Ming ら か に し た. The specific に ア, Pro343-Pro355 and ア, ア, ノ acid combinations が must be である. The <s:1> <s:1> part を holds (about 50%) of the に modification され of the <s:1> MTHFR る part, and the enzymatic activity を検 gives off する とがで とがで る る る る. こ の part outside に MTHFR の リ ン acidification に masato and す る ア ミ ノ acid with column は リ ン カ ー in に 観 examine さ れ な か っ た. こ の Pro343 - Pro355 は, プ ロ リ ン residues の he に 疎 water-based ア ミ と ノ acid salt basic ア ミ ノ acid に rich む で あ る. そ こ で site specific - variant を made し リ ン acidification condition を 観 examine し た が, リ ン acidification に masato and す る ア ミ ノ acid residues の specific に は to ら な か っ た. Contains に, Pro343 - Pro355 を む リ ン カ ー in ア ミ ノ acid with column を reference に し, ペ プ チ ド を synthetic し た. こ の synthetic ペ プ チ ド を chemically modified し, ラ ベ ル ト ラ ン ス フ ァ ー method を も ち い て interaction す る タ ン パ ク qualitative の 検 cable line を っ た. The そ そ results showed that に く く なシグナ なシグナ を検 を検 なシグナ なシグナ を検 を検 を検 <s:1> なシグナ た を検 を検 in the crude extract of insect cells produced <s:1> specific なシグナ を検 を検 た た. Now, the <s:1> タ タ パ パ is the same as を and って る る.

项目成果

Testicular Injury to Rats Fad on Soybean Protein-based Vitamin B_12-Deficient Diet Can Be Reduced by Methionine Supplementation

补充蛋氨酸可减少因食用大豆蛋白维生素 B_12 缺乏饮食而引起的大鼠睾丸损伤

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Nutr. Sci. Vitaminol. (in press)
• 作者: K.Yamada;et al.
• 通讯作者: et al.

ヒト・メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素のリン酸化に関与する因子の検索

寻找参与人亚甲基四氢叶酸还原酶磷酸化的因素

• 发表时间: 2007
• 作者: 山田和弘;他4人
• 通讯作者: 他4人

ホモシステイン関連代謝酵素(血栓症の関連から)

同型半胱氨酸相关代谢酶（与血栓形成相关）

• 发表时间: 2007
• 期刊: 日本血栓止血学会誌 18・2
• 作者: Noriyo Takeda;Keiichiro Kyozuka;Ryusaku Deguchi;Noriyo Takeda;竹田 典代;山田和弘
• 通讯作者: 山田和弘