植物ホルモン分泌性根圏微生物における有用菌株選抜法の開発

植物激素分泌根际微生物有用菌株选择方法的开发

• 批准号: 18880035
• 负责人: 小林 創平
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18880035/
• 关键词: アゾスピリラム属; オーキシン生産; シュードモナス属; DNA; フィンガープリンティング法; アゾスピリラム; 窒素固定; 植物ホルモン; SNP; PCR; PCR-RFLP

1、北農研内の小麦植物体から、キングB培地の蛍光色素を基準にして蛍光性シュードモナス様菌を、RC培地を使ってアゾスピリラム様菌を単離して、オーキシン生産量を調査した結果、その値は菌株間で大きく異なるとともに、分離源り(地域等)や分離法によっても変動した。特に、RC培地ポジティブ菌株の生産量は、他の菌株のそれより高かった。2、シュードモナス属とアゾスピリラム属細菌のオーキシン関連遺伝子、及び、アゾスピリラムの窒素固定関連遺伝子の塩基配列情報に基づいて、多数のPCRプライマーを設計して、既知のリファレンス菌株に適用した結果、一部のPCRプライマーは当該遺伝子を増幅させた。3、収集した菌株やリファレンス菌株のDNAをボイル法にて抽出し、設計したPCRプライマーで当該遺伝子を増幅した結果、その増幅によりアゾスピリラム属菌株を識別できるとともに、DNAバンドの泳動距離からA.brasilenceとlipoferumをも区別することが可能であった。4、設計したPCRプライマーを用いて、当該遺伝子を増幅し、制限酵素処理により一塩基多型を解析した結果、A.brasilenceとlipoferumを区別できるPCR-RFLP法を開発できた。5、開発したDNAフィンガープリンティング法により、十勝菌株のほとんどがA.brasilenceであること、生物研の菌株にはlipoferumが多数含まれること、RC培地ポジティブや蛍光性の菌株の多くは、アゾスピリラム属でないこと、が推測された。ただし、DNAフィンガープリント法の結果とオーキシン生産量などの生理形質の相関関係は明確でなかった。

1. The results of the investigation on the yield of wheat plants in the North Agricultural Research Institute, the differences between strains, isolation sources and isolation methods, and the differences between isolation sources and isolation methods. Special, RC culture, production of strains, other strains of high yield 2. Genomic DNA sequences of bacteria, and gene alignment information of DNA sequences of DNA sequences, most of PCR sequences were designed, and the results of known DNA sequences were analyzed. 3. The DNA of the collected strains was extracted and designed by PCR. When the DNA was amplified, the DNA of the collected strains could be distinguished from A. brasilience and lipoferum. 4. PCR-RFLP method was developed when PCR amplification and restriction enzyme treatment were used to determine the difference between A.brasilence and lipoferum. 5. The development of DNA, the development of A.brasilence, the development of lipoferum, and the development of C. coli. The results of DNA extraction method and the correlation between physiological characteristics and productivity are clear.