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ウエストナイルウイルス受容体下流のシグナル分子とウイルス侵入機構との関連性の解明

阐明西尼罗病毒受体下游信号分子与病毒进入机制的关系

基本信息

批准号：
18890004
负责人：
牧野吉倫
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度に作製した材料を用いて侵入機構の解析を行った。結果(1)リコンビナントEタンパク質を用いたプルダウン法によるウイルス粒子に結合する細胞表面因子の検索と解析:リコンビナントEタンパク質とVero細胞の細胞抽出液を用いてプルダウンアッセイを行ったが有意なバンドは得られなかった。現在、Vero細胞のcDNAライブラリーを発現させたJurkat細胞の中でリコンビナントEタンパク質と結合するクローンを単離することにより、侵入時に必要な宿主因子を検索中である。結果(2)細胞内侵入に必要なシグナル伝達分子の検索と解析:細胞内侵入をより詳細に検討する為に、ウイルス粒子の可視化を行った。安全性を考慮し、SVPsを用い、蛍光色素DiDで蛍光ラベルした。蛍光ラベルSVPsを細胞に接種し、'蛍光顕微鏡を用いてタイムラプスイメージングによりSVPsの挙動を観察した。その結果、細胞膜上に吸着したSVPsは最初1μm/min程度のゆっくりした運動をしたのち、約7μm/min程度のより速い挙動を示した。この速い運動はノコダゾール処理によって消失する為、SVPsは微小管依存的な輸送を受けることが考えられた。またサイトカラシンD処理においても同様であった。以上の結果は、ウエストナイルウイルスがエンドサイトーシス経路を経ると考えられていることと矛盾せず、蛍光ラベルSVPsを用いれば、膜輸送分子およびそれらのシグナル経路とウイルス侵入の関連性を詳細に解析できることが明らかになった。またそれらの膜輸送分子やシグナル経路の阻害剤のウイルス侵入に対しての効果も検討することが可能となった。ウエストナイルウイルスの病態解明や治療方法の確立は急務であるが、本研究ではそれら病態解明や治療法の開発へ向けての基礎的な実験系や知見を提供することが出来たと考えている。

This year's and last year's production materials were analyzed and analyzed by invading the organization. Result (1) The use of リコンビナントEタンパクqualityをいたプルダウン method Analyzes of によるウイルス particles and する cell surface factor の検SOと analysis: リコNovel Cell Extraction Solution for Vero Cellsプルダウンアッセイを行ったが有意思なバンドは得られなかった. Now, the cDNA of Vero cells is the same as that of Jurkat cells. E-タンパク性と合するクローンを単利することにより, necessary host factor during invasion, を検検中である. Result (2) Necessary analysis of intracellular invasion of molecules and analysis of intracellular invasion: Detailed analysis of intracellular invasion and visualization of particles. Safety is not taken into consideration, SVPs are not used, and the pigment DiD is not used.荍光ラベベルSVPsをCell inoculationし、'荍光桕Microscopeを UsedいてタイムラプスイメージングによりSVPsの挙动を禳Observationした. As a result, SVPs adsorbed on the cell membrane initially showed movement at a level of 1 μm/min, and movement at a speed of approximately 7 μm/min.このspeed いkinetic はノコダゾールtreatment によってする, SVPsはmicrotubule-dependent なtransportation けることが考えられた.またサイトカラシンD handles においても同様であった. The above results are as follows:経路を経ると考えられていることとconflictせず、蛍光ラベルSV Ps いれば、membrane transport molecule およびそれらのシグナル経路とウイルスinvasive correlationをDetailed analysisできることが明らかになった. The またそれらのmembrane transport molecule やシグナル経路の hindering のウイルス intrusion に対してのeffect も検することがpossible となった.ウエストナイルウイルスのpathological explanation やThe establishment of treatment methods is an urgent matter であるが、This study is a morbidity The explanation of the treatment method is based on the basic knowledge of the method and the basic knowledge of the method is provided.