权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

骨組織重力ストレス応答におけるMKK高次機能の解明

阐明 MKK 在骨组织重力应力响应中的高阶功能

基本信息

批准号：
18890065
负责人：
中村貴
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890065/
关键词：
MAPキナーゼ骨細胞ノックアウトマウス骨代謝重力ストレス

项目摘要

今年度は、floxed SEK1/MKK7および、Dmp1-CreERT2遺伝子改変マウスの作成を試みた。当初予定していたRecombineering法を用いたターゲティングベクターの作成には、ほぼ全ての塩基配列が判明しているC57BL/6マウスに由来するRPCI23/RPCI24 BACライブラリーの使用が不可欠である。しかしながら当研究室では、マウス作出用のES細胞に129 01a由来のE14K ES細胞を用いている。C57BL/6と12901aの一部遺伝子を用いて配列比較を行ったところ、数十bpに一塩基の割合で異なる塩基対が表れる事が判明した。このため、C57BL/6由来BACクローンを用いて作成したベクターでは、ES細胞における組み換え効率低下の影響を避けられないと判断した。そこで予定を変更し、12901aに由来するDNAを用いて、ターゲティングベクターの構築を試みる事にした。E14KES細胞をフィーダー細胞非存在下にて純粋培養し、12901aゲノムDNAを抽出、PCR法を用いてSEK1/MKK4遺伝子断片を取得した。取得したSEK1/MKK4遺伝子断片に、loxP配列・ネオマイシン耐性遺伝子を組み込み、ネガティブ選択マーカーとしてDTA遺伝子を加え、floxed SEK1/MKK4遺伝子ターゲティングベクターを構築した。構築したベクターをE14K ES細胞にエレクトロポレーション法を用いて遺伝子導入し、G418存在下で1週間に渡って培養、G418耐性コロニーを得た。各々のコロニーからゲノムDNAを抽出し、PCR法・サザンブロッティング法にて相同組換え体ESクローンを3クローン同定した。各クローンをC57BL/6の胚盤胞ヘインジェクション法により導入、floxed SEK1/MKK4キメラマウスを得た。現在、生殖細胞系への移行を確認中である。

This year, floxed SEK1/MKK7, Dmp1-CreERT2 and Dmp1-CreERT2 have made an attempt to improve their performance. At the beginning, it was determined that the Recombineering method should be used to determine the origin of the Recombineering method, which is based on the determination of the origin of the system, which is based on the determination of the origin of the RPCI23/RPCI24 BAC method. The reason for the use of ES cell 129 01a is that E14K ES cell is used in the laboratory. C57BL/6 "12901a" is used to match the number of rows, tens of BP, one base pair, one base pair, one base line, one base pair, one base pair, one base pair, The cause of the disease, the origin of the C57BL/6, the use of the device to make the diagnosis, the ES cell test, the low rate of failure, the avoidance of the disease, the diagnosis of the disease. The reason for the change is 12901a. The reason is that you can use DNA to tell you how to do it. Please tell me that you are sorry. In the absence of E14KES cell culture, 12901a cells were extracted by DNA, and the fragments were obtained by PCR method. Get the SEK1/MKK4 sub-fragments, the loxP configuration, the tolerance sub-fragments, the DTA sub-fragments, the floxed SEK1/MKK4 sub-fragments, the tolerance sub The cell culture of E14K ES was successfully used in this method, and the G418 tolerance test was successfully performed in the presence of G418. In each case, the DNA extraction method and the PCR method were used to determine the same tissue ES content. In each case, the C57BL/6 embryo cells were used in different ways, and the floxed SEK1/MKK4 cells were successfully received. At present, the transition of reproductive cell lines is in the process of confirmation.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Premature ovarian failure in androgen receptor-deficient mice

DOI：
10.1073/pnas.0506736102
发表时间：
2006-01-03
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Shiina, H;Matsumoto, T;Kato, S
通讯作者：
Kato, S

ステロイドホルモン受容体群の転写制御機能と疾患

类固醇激素受体的转录控制功能与疾病