精子および体細胞の顕微注入によるブタ,クジラ胚の体外生産

通过显微注射精子和体细胞体外生产猪和鲸鱼胚胎

• 批准号: 06F06443
• 负责人: 福井 豊
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06443/
• 关键词: 発生工学; 精子; 体細胞; バイオテクノロジー; ブタ; クジラ; 胚生産; 顕微注入

本研究は、平成18年11月からスタートした。最終年度の平成20年度は、北西太平洋鯨類捕獲調査(平成19年5〜8月)に参加して採取したイワシクジラ未成熟卵子(卵母細胞)の体外成熟、凍結融解精子による体外受精(顕微受精を含む)またはクジラ胎児の体細胞(胎子繊維芽細胞)をウシ卵子に顕微注入した後の卵分割および胚発生について検討して、以下の成果を得た。1)体調16cm、51gのイワシクジラ胎児から作成した体細胞を、除核したウシ体外成熟卵子に顕微注入した。その結果、卵子の活性化処理時間およびクジラ体細胞の培養条件に係わらず、偽前核形成率は1.6-1.7%と低く、また分割率も2.9-3.2%であった。1個の胚盤胞が観察されたが、クジラDNAを有していなかった。2)顕微注入に関する除核法の改良、体細胞注入前のウシ体外成熟卵子の除核の確認を実施した結果、対照区のウシ単為発生胚の90%に比べて、クジラ体細胞注入後の偽前核形成率は60%に向上し、分割率も20%となった。しかし、胚盤胞への発生は観察できなかった。以上の結果、目標であったクジラ体細胞の顕微注入によるクジラ胚盤胞の体外生産は実現できなかったが、除核されたウシ卵子細胞室内にクジラ体細胞の核を顕微注入することにより、4-8細胞期のクジラ胚を作出できたことは大きな成果であり、他の哺乳動物、特に家畜で行われている体細胞クローン胚の作成がクジラでも一部可能である事を示した。

This study らスタ, Heisei 18 November ト らスタ た. Final year の 20 year は pp.47-53, north west Pacific whales capture survey (pp.47-53 19 years from may to August) に attend し て take し た イ ワ シ ク ジ ラ immature egg (oocyte) の sperm in vitro maturation and freeze melting に よ る を む) (顕 micro fertilization in vitro fertilization ま た は ク ジ ラ tire where の cells (tire 繊 d bud cells) を ウ シ eggs に 顕 micro injection After た た oocyte segmentation および embryo development に て検 て検 seek て, the following <s:1> results を obtain た. 1) body 16 cm, 51 g の イ ワ シ ク ジ ラ tire where か ら made し た somatic を, in addition to the nuclear し た ウ シ mature eggs in vitro に 顕 micro injection し た. そ の results, egg の activeness 処 manage time お よ び ク ジ ラ somatic の culture conditions に department わ ら は ず, pseudo pronucleus formation rate 1.6 1.7% low と く, ま も た segmentation rate 2.9 3.2% で あ っ た. One embryonic blastocyst が観 is found to have されたが, <s:1> ジラDNAを and <s:1> て な な った った. 2) 顕 micro injection に masato す る の denucleation method improvement, somatic cell injection before の ウ シ mature eggs in vitro の denucleation の confirm を be applied し た results, according to area の seaborne ウ シ 単 borne 発 embryo の 90% に べ て, ク ジ ラ cells after injection の pseudo pronucleus formation rate は に も し, segmentation rate up 60% and 20% と な っ た. <s:1> な, blastocyst へ, な, 観, 観, chasm で, な, った. の results above, target で あ っ た ク ジ ラ somatic の 顕 micro injection に よ る ク ジ ラ blastoderm cell in vitro の production は be presently で き な か っ た が, in addition to the nuclear さ れ た ウ シ egg cell interior に ク ジ ラ somatic nuclear を の 顕 micro injection す る こ と に よ り, 4 to 8 cell stage の ク ジ ラ embryo を make で き た こ と は big き な results で あ り, he の mammals, special Line に livestock で わ れ て い る somatic ク ロ ー ン embryo の made が ク ジ ラ で も a possible で あ る matter を shown し た.

项目成果

In vitro culture conditions using chemically defined media for in vitro matured and intracytoplasmically inseminated porcine oocytes

使用化学成分确定的培养基进行体外成熟和胞浆内授精的猪卵母细胞的体外培养条件

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Reproduction and Development 52・5
• 作者: Lubna Yasmin;Shigeharu Kinoshita;Daiske Ikeda;Yosuke Ono and Shuo Watabe;Bhuiyan MMU;Bhuiyan MMU;Fukui Y.;Nagai H.;Kobayashi M.;Kamiya C.
• 通讯作者: Kamiya C.

Blastocyst production by in vitro maturation and development of porcine oocytes in defined media following intracytoplasmic sperm injection

胞浆内精子注射后猪卵母细胞在确定培养基中体外成熟和发育产生囊胚

• 发表时间: 2007
• 期刊: Zygote 15・2
• 作者: Lubna Yasmin;Shigeharu Kinoshita;Daiske Ikeda;Yosuke Ono and Shuo Watabe;Bhuiyan MMU;Bhuiyan MMU;Fukui Y.;Nagai H.;Kobayashi M.
• 通讯作者: Kobayashi M.

Attempts at in vitro fertilization and culture of in vitro matured oocytes in Sei (Balaenopetra borealis) and Bryde's (B. edini) whales

北鲸和布氏鲸的体外受精和体外成熟卵母细胞培养的尝试

• 发表时间: 2008
• 期刊: Zygote (印刷中)(Submitted)
• 作者: Lubna Yasmin;Shigeharu Kinoshita;Daiske Ikeda;Yosuke Ono and Shuo Watabe;Bhuiyan MMU;Bhuiyan MMU
• 通讯作者: Bhuiyan MMU

Attempt at intracytoplasmic sperm injection of in vitro matured oocytes inkcommon minke whales (Balaenopetra acutorostrata) captured during the Kushirocoast survey

钏路海岸调查期间捕获的小须鲸（Balaenopetra acutorostrata）体外成熟卵母细胞胞浆内精子注射的尝试

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Reproduction and Development 53-4
• 作者: Lubna Yasmin;Shigeharu Kinoshita;Daiske Ikeda;Yosuke Ono and Shuo Watabe;Bhuiyan MMU;Bhuiyan MMU;Fukui Y.
• 通讯作者: Fukui Y.

Attempts at in vitro fertilization and culture of in vitro matured oocytes in Sei (Balaenopetra borealis) and Bryde's (B. edins) whales

北鲸和布氏鲸的体外受精和体外成熟卵母细胞培养的尝试

• 发表时间: 2008
• 期刊: Zygote
• 影响因子: 1.7
• 作者: Lubna Yasmin;Shigeharu Kinoshita;Daiske Ikeda;Yosuke Ono and Shuo Watabe;Bhuiyan MMU
• 通讯作者: Bhuiyan MMU