精子および体細胞の顕微注入によるブタ,クジラ胚の体外生産

本研究は、平成18年11月からスタートした。最終年度の平成20年度は、北西太平洋鯨類捕獲調査(平成19年5〜8月)に参加して採取したイワシクジラ未成熟卵子(卵母細胞)の体外成熟、凍結融解精子による体外受精(顕微受精を含む)またはクジラ胎児の体細胞(胎子繊維芽細胞)をウシ卵子に顕微注入した後の卵分割および胚発生について検討して、以下の成果を得た。1)体調16cm、51gのイワシクジラ胎児から作成した体細胞を、除核したウシ体外成熟卵子に顕微注入した。その結果、卵子の活性化処理時間およびクジラ体細胞の培養条件に係わらず、偽前核形成率は1.6-1.7%と低く、また分割率も2.9-3.2%であった。1個の胚盤胞が観察されたが、クジラDNAを有していなかった。2)顕微注入に関する除核法の改良、体細胞注入前のウシ体外成熟卵子の除核の確認を実施した結果、対照区のウシ単為発生胚の90%に比べて、クジラ体細胞注入後の偽前核形成率は60%に向上し、分割率も20%となった。しかし、胚盤胞への発生は観察できなかった。以上の結果、目標であったクジラ体細胞の顕微注入によるクジラ胚盤胞の体外生産は実現できなかったが、除核されたウシ卵子細胞室内にクジラ体細胞の核を顕微注入することにより、4-8細胞期のクジラ胚を作出できたことは大きな成果であり、他の哺乳動物、特に家畜で行われている体細胞クローン胚の作成がクジラでも一部可能である事を示した。

本研究は、平成18年11月からスタートした。最終年度の平成20年度は、北西太平洋鯨類捕獲調査(平成19年5〜8月)に参加して採取したイワシクジラ未成熟卵子(卵母細胞)の体外成熟、凍結融解精子による体外受精(顕微受精を含む)またはクジラ胎児の体細胞(胎子繊維芽細胞)をウシ卵子に顕微注入した後の卵分割および胚発生について検討して、以下の成果を得た。1)体調16cm、51gのイワシクジラ胎児から作成した体細胞を、除核したウシ体外成熟卵子に顕微注入した。その結果、卵子の活性化処理時間およびクジラ体細胞の培養条件に係わらず、偽前核形成率は1.6-1.7%と低く、また分割率も2.9-3.2%であった。1個の胚盤胞が観察されたが、クジラDNAを有していなかった。2)顕微注入に関する除核法の改良、体細胞注入前のウシ体外成熟卵子の除核の確認を実施した結果、対照区のウシ単為発生胚の90%に比べて、クジラ体細胞注入後の偽前核形成率は60%に向上し、分割率も20%となった。しかし、胚盤胞への発生は観察できなかった。以上の結果、目標であったクジラ体細胞の顕微注入によるクジラ胚盤胞の体外生産は実現できなかったが、除核されたウシ卵子細胞室内にクジラ体細胞の核を顕微注入することにより、4-8細胞期のクジラ胚を作出できたことは大きな成果であり、他の哺乳動物、特に家畜で行われている体細胞クローン胚の作成がクジラでも一部可能である事を示した。