ウシ体外成熟・体外受精卵子の体外発生用完全無血清培地の検討:細胞成長因子を中心として

牛受精卵体外成熟和体外发育的完全无血清培养基研究：以细胞生长因子为中心

• 批准号: 05660321
• 负责人: 福井 豊
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660321/
• 关键词: 細胞成長因子; 体外成熟; 体外受精; 体外発生; ウシ卵胞内卵子

体外成熟・体外受精されたウシ卵子の体外発生(胚盤胞期への発生)に及ぼす種々の細胞成長因子の効果について検討した。(実験I)ヒトleukemia inhibitory factor(hLIF)の効果合成卵管液(Synthetic oviduct fluid medium:SOFM)に,血清(ヒト血清:10%HS),ウシ血清アルブミン(1.5%BSA)またはポリビニール・アルコール(0.1%PVA)含有の培養液を用いて,1細胞期,4,8細胞期,桑実胚および初期胚盤胞が拡張胚盤胞または脱出胚盤法へ発育する効果を検討した。その結果,血清含有のSOFMでは500〜6,000U/mlのhLIF添加した効果は認められなかったが,BSAまたはPVA含有のSOFMでは5,000U/ml hLIFの添加は桑実胚および初期胚盤胞の発生を有意に促進した。(実験II)種々の細胞成長因子の効果2,8細胞期,桑実胚および初期胚盤胞の拡張または脱出胚盤胞への発生に及ぼす4種(bFGF,EGF,IGF,TGFβ1)の細胞成長因子の効果を検討した。なお,対照区として血清(HS)添加SOFMおよびSOFM+PVA(0.1%)を設け,細胞成長因子はすべてSOFM+PVAに添加した。その結果,SOFM+HS区の拡張胚盤胞への発生率は2,4細胞期,桑実胚,初期胚盤胞で各々37,37,80,93%であった。SOFM+PVA+細胞成長因子添加区は桑実胚および初期胚盤胞において細胞成長因子無添加区(SOFM+PVA)より高い発生率を示したが,2および8細胞期についてはその効果は認められなかった。以上の結果より,hLIFおよびその他の細胞成長因子の効果は胚の発育ステージおよび培養液中の血清添加の有無によって異なることが示唆された。

In vitro maturation, in vitro fertilization, in vitro development of eggs (blastoderm development) and in vitro development of cell growth factors (I) The Synthetic oviduct fluid medium (SOFM) containing hLIF, serum (HLIF:10%HS), serum albumin (1.5%BSA) and anti-leukemia (0.1%PVA) was used in the medium containing hLIF, 1-cell stage, 4-cell stage, 8-cell stage, mulberry embryo stage and early blastoderm cell stage. As a result, the serum contained SOFM of 500 ~ 6,000 U/ml and hLIF was added to promote the development of embryonic cells. BSA and PVA contained SOFM of 5,000 U/ml and hLIF were added to promote the development of embryonic cells. (II) The effects of four kinds of cell growth factors (bFGF,EGF,IGF,TGFβ1) on the development of embryonic blastoderm cells were studied. In contrast, SOFM+PVA(0.1%) was added to HS, and cell growth factor was added to SOFM+PVA. In SOFM+HS region, the growth rate of blastoderm cells was 2, 4 cell stage, 37, 37, 80, 93% respectively. SOFM+PVA+ cell growth factor-added zone (SOFM+PVA)-high survival rate, 2 - 8 cell stage, 2 - 8 cell stage The above results indicate that hLIF and other cell growth factors are responsible for embryo development and the presence or absence of serum in culture medium.

项目成果

Y.-M.Han: "Factors affecting viability of IVF-derived bovine blastocysts after freezing and thawing" Theriogenology. 41. 212 (1994)

Y.-M.Han：“冷冻和解冻后 IVF 衍生牛胚泡活力的影响因素”动物发生学。

K.Matsuyama: "Effect of glucose levels during the in vitro culture in synthetic oviduct fluid medium on in vitro development of bovine oocytes matured and fertilized in vitro" Theriogenology. 40. 595-605 (1993)

K.Matsuyama：“合成输卵管液体培养基体外培养过程中葡萄糖水平对体外成熟和受精的牛卵母细胞体外发育的影响”动物发生学。

Y.Fukui: "Development of bovine embryos matured and fertilized in vitro in media containing human leukemia inhibitory factor" Theriogenology. 41. 199 (1994)

Y.Fukui：“在含有人白血病抑制因子的培养基中体外成熟和受精的牛胚胎的发育”动物发生学。