両生類甲状腺刺激ホルモン分泌調節機構に関する研究

两栖动物促甲状腺素分泌调控机制研究

基本信息

批准号：
06J01847
负责人：
岡田令子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

両生類甲状腺刺激ホルモン(TSH)は、最近まで高感度で特異的な測定法が開発されていなかったため、その放出制御機構が明らかにされていなかった。両生類TSHの放出制御機構を明らかにするために、筆者はこれまでにウシガエルTSHの放射免疫測定(RIA)法を開発し、またその後RIA法と同程度に高感度な酵素結合免疫測定(ELISA)を開発し、それらを用いて両生類下垂体からのTSH放出に影響を及ぼす因子について解析を進めてきた。その結果、哺乳類とは違って副腎刺激ホルモン放出因子(CRF)が強い両生類TSH放出活性をもつことを明らかにし、CRFによるTSH放出は2型CRF受容体を介して調節されることを受容体選択的な作動剤・拮抗剤を用いた実験により示した。本年度は、2型CRF受容体mRNAがウシガエル下垂体TSH産生細胞に発現していることをin situ RT-PCRと免疫組織化学の組み合わせにより明らかにした。このことは、CRFによるTSH放出が2型CRF受容体を介して調節されることを裏付けた。また、生体内で実際にTSH放出調節因子として機能している物質を明らかにするために、ウシガエル視床下部の抽出物からTSH放出に影響を及ぼす物質の単離を行った。視床下部抽出物を作製し、主に逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離し、各画分のTSH放出活性をウシガエル下垂体細胞培養とELISAによりしらべることで、TSH放出活性を示すいくつかの物質の単離に成功した。その中の一つはCRFであった。また、他の物質の一つはN末端アミノ酸配列解析により、ラナタキキニンAであると推定された。ラナタキキニンAを含む物質Pファミリーペプチドが両生類TSH放出調節活性を有することは、本研究で初めて明らかとなった。

直到最近，还没有开发出两栖动物甲状腺刺激激素（TSH）的敏感和特定测定，因此尚未阐明其受控的释放机制。 To clarify the controlled release mechanism of amphibian TSH, the author has developed a radioimmunoassay (RIA) method for bullfrog TSH, and has since developed enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) that are as sensitive as the RIA method, and has used these methods to analyze factors that affect TSH release from the amphibian pituitary gland.结果表明，与哺乳动物不同，肾上腺刺激激素释放因子（CRF）具有强大的两栖动物TSH释放活性，并且使用受体选择性激动剂和拮抗剂的实验表明，CRF通过2型CRF受体调节CRF的TSH释放。今年，我们透露，2型CRF受体mRNA通过将原位RT-PCR和免疫组织化学结合在牛肉垂体TSH产生细胞中表达。这证实CRF通过2型CRF受体调节TSH释放。此外，为了阐明实际上充当TSH释放调节剂的物质，从牛蛙下丘脑的提取物中分离出影响TSH释放的物质。制备下丘脑提取物，主要通过使用反向相位柱的高性能液相色谱分离，并通过牛蛙垂体细胞培养和ELISA检查每个馏分的TSH释放活性，并成功隔离了几种表现出TSH释放活性的物质。其中之一是CRF。此外，通过分析N末端氨基酸序列，估计其他物质之一为lanatachykinin a。这项研究首先表明，含有lanatachykinin A的P家族肽具有两栖动物TSH释放调节活性。