時間分解非線形分光法によるタンパク質間相互作用ダイナミクスの研究

使用时间分辨非线性光谱研究蛋白质-蛋白质相互作用动力学

• 批准号: 06J02688
• 负责人: 井上 圭一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J02688/
• 关键词: 過渡回折格子法; センサリーロドプシンII; トランスデューサー; 拡散定数変化; HAMPドメイン; タコロドプシン

D75N Sensory rhodopsin II変異体とトランスデューサータンパク質との複合タンパク質の大腸菌を用いた発現を行うため、培養システムとタンパク質精製系の新たな構築を行い、実際に培地に対して10mg/L以上の非常に高い収率でタンパク質が得ることに成功した。得られたタンパク質を溶液中に界面活性剤を用いて可溶化し、過渡回折格子測定を行ったところ、光反応途中における体積変化を測定し、これまで知られていなかった反応中間体の観測に成功した。またこのタンパク質複合体では光反応の途中において大きな過渡的な拡散定数変化があることがわかり、始状態と中間状態でおおよそ2倍の拡散定数の変化があることを明らかにした。さらに濃度変化などの実験からこの拡散定数変化はトランスデューサータンパク質の膜貫通領域のC末端側に位置するHAMPドメインの二次構造変化によるものであると明らかにし、Sensory rhodoposin IIとトランスデューサータンパク質の細胞内信号伝達過程において生理学的に重要だと思われる構造変化を初めて時間変化で測定した。また別のロドプシンタンパク質として無脊椎動物のロドプシンの典型例であるタコロドプシンの光反応を調べた。特に活性化状態から始状態への戻り反応ダイナミクスを過渡吸収・過渡回折格子法の二つの分光法を用いて研究し、これまで知られていなかった二つの中間体の存在を明らかにした。これによると順反応に置いて変化したタコロドプシンの吸収スペクトルは、戻り反応において200ns以下の時間領域でもさらに戻り反応においてほぼ元のものに戻っており、タンパク質の構造変化が非常に早い時間スケールで緩和していることが明らかになった。また順反応で減少した拡散定数が逆に元の始状態のものに1ミリ秒以下の時間スケールで元に戻ることを明らかにした。

In D75N Sensory rhodopsin II, there is a high rate of success in terms of the rate of success, and the rate of success. The results show that the interfacial activity in the solution is soluble in the solution, the temperature in the solution is determined by the cross-fold lattice, and the temperature is measured by the photosensitizer in the solution. In the middle of the light response, the number of dispersion of the traffic was changed, and the number of dispersion in the initial status was 2 times higher than that in the initial state. In order to improve the quality of the film, the position of the C-terminal, the position of the Sensory rhodoposin II is responsible for the acquisition of intracellular signals that are important in physiology. It is necessary to establish a time-based measurement system. I don't know. I don't know. In particular, the active status system is sensitive to the absorption process, the absorption process, the folding lattice method, the two-dimensional spectroscopic method, and so on. It is known that there is a clear error in the system. You need to know that you can use the following information in the field of 200ns. You can use the following information to make sure that you are in the market. You need to know that you are not in the market. It is important to check that the number of variables is not stable. The initial status is less than 1 millisecond.

项目成果

Tetramer formation kinetics in the signaling state of AppA monitored by time-resolved diffusion

• DOI: 10.1529/biophysj.106.083915
• 发表时间: 2006-07-15
• 期刊: BIOPHYSICAL JOURNAL
• 影响因子: 3.4
• 作者: Hazra, Partha;Inoue, Keiichi;Terazima, Masahide
• 通讯作者: Terazima, Masahide

Laser-Induced Transient Grating Analysis of Dynamics of Interaction between Sensory Rhodposin II D75N and the HtrII Transducer

激光诱导瞬态光栅分析感觉 Rhodposin II D75N 与 HtrII 传感器之间相互作用的动力学

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biophysical Journal 92
• 作者: Keiichi Inoue;Jun Sasaki;John L.Spudich;Masahide Terazima
• 通讯作者: Masahide Terazima

Photoreverse reaction dynamics of octopus rhodopsin

章鱼视紫红质的光逆反应动力学

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biophysical Journal 92・10
• 作者: Sowa;Y.;Rowe;A.;Leake;M.;Yakushi;T.;Homma;M.;Ishijima;A.;Berry;R.;石島 秋彦;Ikurou Suzuki;Kenji Yasuda;Ikurou Suzuki;Koudai Oikawa;安田賢二;Atsushi Kira;Keuchi Inoue
• 通讯作者: Keuchi Inoue