T細胞におけるIL-7レセプターの発現制御機構と生理的意義の解明

阐明T细胞中IL-7受体的表达控制机制和生理意义

• 批准号: 06J03442
• 负责人: 柴田 寛文
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J03442/
• 关键词: サイトカイン; IL-7R; T細胞; TCRシグナル

活性化T細胞においてTCRシグナルによるIL-7Rα転写抑制に関与する標的転写因子を同定し、細胞表面レベルから細胞核に至るIL-7Rαの転写制御機構を明らかにするため、末梢T細胞におけるNucleofectorを用いた遺伝子導入実験を行った。p38経路がIL-7Rαの転写抑制に重要かどうかを確認するため、p38の上流分子MKK6の恒常的活性型を、マウス末梢T細胞にNucleofectorを用いて遺伝子導入し、TCRシグナル非依存的にIL-7Rαの発現低下が惹起されるかどうかをFACSと定量的RT-PCR法にて解析した。また、IL-7Rαの転写抑制に関与する転写因子を絞り込むために、IL-7Rαプロモーター領域に存在する転写因子の結合配列に変異を導入した種々のレポーターDNAを、Nucleofectorを用いて末梢T細胞に遺伝子導入し、抗CD3抗体刺激によって、レポーター活性に変化が見られるかどうかを解析することで、TCRシグナルによって影響を受ける転写因子の候補を絞り込むことを計画した。これらの実験計画と平行して、T細胞分化過程におけるIL-7Rα発現低下の生理的意義の解明を目指し、Proximal lck promoterの下流にIL-7Rα-IRES-GFPを連結させ、トランスジェニックマウスを作製した。トランスジーンを発現するF1個体を得て、それらの胸腺、脾臓に分布するCD4SP細胞、CD8SP細胞の比率を野生型と比較したが、顕著な差は認められなかった

Activation of T cells に お い て TCR シ グ ナ ル に よ る IL - 7 r alpha planning write inhibit に masato and す る target planning write factor を with し, cell surface レ ベ ル か ら に nucleus to る IL - 7 r alpha の planning system of writing imperial institutions を Ming ら か に す る た め, peripheral t-cell に お け る Nucleofector を with い た heritage 伝 son import be 験 を line っ た . P38 lightning 経 road が IL - 7 r alpha の planning write inhibit に important か ど う か を confirm す る た め, p38 lightning の high molecular MKK6 の constant activity を, マ ウ ス peripheral t-cell に Nucleofector を with い て heritage 伝 import し, TCR シ グ ナ ル of interdependent に IL - 7 r alpha の 発 now low が provoked さ れ る か ど う か を F Quantitative RT-PCR of ACSと にて analysis of にて た. ま た, IL - 7 r alpha の planning write inhibit に masato and す る planning write factor を ground り 込 む た め に, IL - 7 r alpha プ ロ モ ー タ に ー field exist す る の planning write factor combined with column に - different を import し た kind 々 の レ ポ ー タ ー DNA を, Nucleofector を with い て traces of peripheral T cell に 伝 import し, anti CD3 antibody stimulation に よ っ て, レ ポ ー タ に ー activity - the が see ら れ る か ど う か を parsing す る こ と で, TCR シ グ ナ ル に よ っ て を by け る planning write factor の alternate を ground り 込 む こ と を project し た. こ れ ら の be 験 project と parallel し て, T cell differentiation process に お け る IL - 7 r low alpha 発 is の physiological significance の interpret を refers し, Proximal LCK promoter の obscene に IL - 7 r alpha IRES - GFP を link さ せ, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を cropping し た. ト ラ ン ス ジ ー ン を 発 now す る F1 individuals を て, そ れ ら の thymus, splenic に す る CD4SP cells, CD8SP の ratio を wild-type と compare し た が, poor 顕 the な は め ら れ な か っ た