HPLC/MSによる血清糖タンパク質糖鎖及び糖ペプチドの網羅的解析法の確立

HPLC/MS血清糖蛋白糖链和糖肽综合分析方法的建立

• 批准号: 06J04223
• 负责人: 武川 泰啓
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J04223/
• 关键词: 糖タンパク質; 糖鎖; 糖ペプチド; 質量分析; MS; LC-MS; MS^n; 血清

1.糖ペプチドの高感度な分析法の確立これまでに私は両性イオン型親水性クロマトグラフィー(ZIC-HILIC)により糖鎖・糖ペプチドの選択的かつ高分離能な分離が可能であることを示してきた。今回、カラムをキャピラリーサイズ(75μmI.D.)にし、nanoESIでイオン化することで、わずか150ngのエリスロポイチン(糖タンパク質)から100種以上の糖ペプチドを解析することに成功し、非常に高感度な分析法を確立した。2.糖鎖・糖ペプチドの2次元HPLC/MS分析法の確立プロテオミクスにおいて、複雑なサンプルからより多くのタンパク質を同定するために、イオン交換カラムと逆相カラムを組み合わせた2次元HPLC/MSによるタンパク同定法が使用されている。しかし、これまで糖鎖分析に関してはこのような2次元HPLCの手法は存在せず、非常に複雑なサンプルの解析は困難であった。そこで私は、イオン交換カラムと糖鎖・糖ペプチドの分離に非常に有効な手段であるZIC-HILICカラムを組み合わせることで、2次元HPLC/MSによる糖鎖解析法を初めて確立した。これにより、非常に複雑なサンプルであっても分析することが可能となった。3.安定同位体による比較グライコミクス法の確立プロテオミクスでは、サンプル間の相対的定量をするめに安定同位体ラベルを使用した比較プロテオミクス手法がよく使用されている。近年、糖鎖においても比較グライコミクスの手法が報告されている。しかし、親水的な糖鎖に疎水的なラベル化を用いるため、逆相カラムにおいて軽ラベル体と重ラベル体が分離してしまい、定量性の悪化が問題点としてあった。そこで、私はZIC-HILICを用いることで軽ラベル体と重ラベル体が単一ピークとして観測できることを示した。これにより、プロテオミクスと同レベルの定量性を有した比較グライコミクス研究が可能となった。

1. The method of high sensitivity analysis makes sure that the selection of high isolation energy separation may show that there is no significant difference between the two types of food, water, sugar, sugar This time, please tell me what to do (75 μ mI.D.) The analysis of more than 100 kinds of sugar is successful, the analysis of nanoESI is successful, and the result of very high sensitivity analysis is confirmed by the analysis of more than 100 kinds of sugar in the laboratory, nanoESI analysis and high sensitivity analysis. two。 The two-dimensional HPLC/MS analysis method was used to determine the accuracy of the two-dimensional HPLC/MS analysis method. The existence of two-dimensional HPLC manipulation is very complicated and difficult to analyze. There is a lot of information about the separation of sugar, sugar, This is not a good idea. I don't know. I don't know. I don't know. 3. The method of diazepam measurement is to make sure that the quantitative measurement of diazepam and diazepam isotope is in good condition. In recent years, there have been a lot of reports on sugar consumption in recent years. The concentration of sugar in water, the sugar in the water, the sugar in the water. Please tell me that the weight of the body is heavy and the weight of the body is heavy when you use the private ZIC-HILIC to show the weight of the body. There is a difference in the number of quantitative studies that may be found in the study.

项目成果

Simple separation of isomeric sialylated N-glycopeptides by a zwitterionic type of hydrophilic interaction chromatography

• DOI: 10.1002/jssc.200600133
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE
• 影响因子: 3.1
• 作者: Takegawa, Yasuhiro;Deguchi, Kisaburo;Nishimura, Shin-Ichiro
• 通讯作者: Nishimura, Shin-Ichiro

Chromatographic deuterium isotope effects of derivatized N-glycans and N-glycopeptides in a zwitterionic type of hydrophilic interaction chromatography.

• DOI: 10.1002/jssc.200700659
• 发表时间: 2008-05
• 期刊: Journal of separation science
• 影响因子: 3.1
• 作者: Yasuhiro Takegawa;M. Hato;Kisaburo Deguchi;H. Nakagawa;S. Nishimura

Detection of altered N-glycan profiles in whole serum from rheumatoid arthritis patients

• DOI: 10.1016/j.jchromb.2007.03.003
• 发表时间: 2007-06-15
• 期刊: JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES
• 影响因子: 3
• 作者: Nakagawa, Hiroaki;Hato, Megumi;Nishimura, Shin-Ichiro
• 通讯作者: Nishimura, Shin-Ichiro

Direct structural assignment of neutral and sialyalted N-glycopetides using collision-induced dissociation MS^n spectral matching

使用碰撞诱导解离 MS^n 光谱匹配直接确定中性和唾液酸化 N-糖肽的结构

• 发表时间: 2006
• 期刊: Rapid Communications in Mass Spectrometry 20
• 作者: Sohiko Kameyama;et. al.;Yasuhiro Takegawa;Yasuhiro Takegawa;Hiroaki Nakagawa;Kisaburo Deguchi;Hiroaki Nakagawa;Yasuhiro Takegawa;Hiroki Ito
• 通讯作者: Hiroki Ito