HPLC/MSによる血清糖タンパク質糖鎖及び糖ペプチドの網羅的解析法の確立

HPLC/MS血清糖蛋白糖链和糖肽综合分析方法的建立

• 批准号: 06J04223
• 负责人: 武川 泰啓
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J04223/
• 关键词: 糖タンパク質; 糖鎖; 糖ペプチド; 質量分析; MS; LC-MS; MS^n; 血清

1.糖ペプチドの高感度な分析法の確立これまでに私は両性イオン型親水性クロマトグラフィー(ZIC-HILIC)により糖鎖・糖ペプチドの選択的かつ高分離能な分離が可能であることを示してきた。今回、カラムをキャピラリーサイズ(75μmI.D.)にし、nanoESIでイオン化することで、わずか150ngのエリスロポイチン(糖タンパク質)から100種以上の糖ペプチドを解析することに成功し、非常に高感度な分析法を確立した。2.糖鎖・糖ペプチドの2次元HPLC/MS分析法の確立プロテオミクスにおいて、複雑なサンプルからより多くのタンパク質を同定するために、イオン交換カラムと逆相カラムを組み合わせた2次元HPLC/MSによるタンパク同定法が使用されている。しかし、これまで糖鎖分析に関してはこのような2次元HPLCの手法は存在せず、非常に複雑なサンプルの解析は困難であった。そこで私は、イオン交換カラムと糖鎖・糖ペプチドの分離に非常に有効な手段であるZIC-HILICカラムを組み合わせることで、2次元HPLC/MSによる糖鎖解析法を初めて確立した。これにより、非常に複雑なサンプルであっても分析することが可能となった。3.安定同位体による比較グライコミクス法の確立プロテオミクスでは、サンプル間の相対的定量をするめに安定同位体ラベルを使用した比較プロテオミクス手法がよく使用されている。近年、糖鎖においても比較グライコミクスの手法が報告されている。しかし、親水的な糖鎖に疎水的なラベル化を用いるため、逆相カラムにおいて軽ラベル体と重ラベル体が分離してしまい、定量性の悪化が問題点としてあった。そこで、私はZIC-HILICを用いることで軽ラベル体と重ラベル体が単一ピークとして観測できることを示した。これにより、プロテオミクスと同レベルの定量性を有した比較グライコミクス研究が可能となった。

1. The high sensitivity analysis method for sugar selection was established, and the separation was possible due to the high separation energy of sugar selection. This time, the color of the film is the color of the film (75μ m I.D.) The nanoESI method was successfully established for the analysis of more than 100 kinds of sugars. 2. Establishment of a new method for the determination of sugar residues by 2D HPLC/MS, and the use of a new method for the determination of sugar residues by HPLC/MS It is difficult to analyze sugar chain by 2D HPLC. A new method for the analysis of sugar chains by 2D HPLC/MS was established. This makes it possible to conduct analysis on a very complex server. 3. Stable isotope comparison method for the establishment of a quantitative comparison between stable isotopes and stable isotopes In recent years, sugar lock in the middle of the comparison of the method of reporting The problem of separation and quantitative analysis of hydrophilic sugar and water is that they can be separated from each other in reverse phase. ZIC-HILIC is used to test and evaluate the quality of the products. This study is based on a quantitative analysis of the relationship between the two groups.

项目成果

Simple separation of isomeric sialylated N-glycopeptides by a zwitterionic type of hydrophilic interaction chromatography

• DOI: 10.1002/jssc.200600133
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE
• 影响因子: 3.1
• 作者: Takegawa, Yasuhiro;Deguchi, Kisaburo;Nishimura, Shin-Ichiro
• 通讯作者: Nishimura, Shin-Ichiro

Chromatographic deuterium isotope effects of derivatized N-glycans and N-glycopeptides in a zwitterionic type of hydrophilic interaction chromatography.

• DOI: 10.1002/jssc.200700659
• 发表时间: 2008-05
• 期刊: Journal of separation science
• 影响因子: 3.1
• 作者: Yasuhiro Takegawa;M. Hato;Kisaburo Deguchi;H. Nakagawa;S. Nishimura

Detection of altered N-glycan profiles in whole serum from rheumatoid arthritis patients

• DOI: 10.1016/j.jchromb.2007.03.003
• 发表时间: 2007-06-15
• 期刊: JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES
• 影响因子: 3
• 作者: Nakagawa, Hiroaki;Hato, Megumi;Nishimura, Shin-Ichiro
• 通讯作者: Nishimura, Shin-Ichiro

Direct structural assignment of neutral and sialyalted N-glycopetides using collision-induced dissociation MS^n spectral matching

使用碰撞诱导解离 MS^n 光谱匹配直接确定中性和唾液酸化 N-糖肽的结构

• 发表时间: 2006
• 期刊: Rapid Communications in Mass Spectrometry 20
• 作者: Sohiko Kameyama;et. al.;Yasuhiro Takegawa;Yasuhiro Takegawa;Hiroaki Nakagawa;Kisaburo Deguchi;Hiroaki Nakagawa;Yasuhiro Takegawa;Hiroki Ito
• 通讯作者: Hiroki Ito