GSK-3βの抑制によるWntシグナルの増強を介した骨形成誘導法に関よる研究

抑制GSK-3β增强Wnt信号成骨诱导方法的研究

• 批准号: 06J04266
• 负责人: 中島 愛子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J04266/
• 关键词: 骨形成; 骨芽細胞; Wnt; GSK-3β; tRNaseZL

GSK-3βを抑制させWntシグナリングを活性化させるsgRNAの2'-O-methyl化RNAを合成した.また,2'4'-Bridged Nucleic Acid(LNA : Locked Nucleic Acid)をいくつかの塩基に挿入した種々の2'-O-メチル化RNAを合成した.これらのsgRNAを,293細胞,MC3T3-E1細胞,CH310T1/2細胞等にトランスフェクションして,リアルタイムRT-PCR法,Western blot法などにより,骨芽細胞の分化の指標となるmRNA発現などに及ぼす影響を調べた.LNA塩基を挿入することによって,ノックダウン効果がどのように変わるかについて詳細に調べたところ,ある部位へのLNA塩基の挿入はノックダウン効果を増大させることが明らかになった.さらに,TLR5,6といった一本鎖核酸に応答する受容体を介したインターフェロン誘導についてELISA法を用いて調べたところ,IFN-αの産生は認めれず,有害性がないことが考えられた.マウス個体にzenograftによってsgRNAを投与する系を確立した.HL60細胞をこの方法により投与して腫瘍の形成が認められた.このマウスにsgRNAを投与すると腫瘍の増大の減少が認められ,in vivoで,sgRNAの効果が明らかになった.これまでにin vitroで効果が認められたsgRNAをマウスに局所ならびに全身投与した.pQCTを用いて,このマウスの骨量ならびに骨形成量を測定したところ,骨量の有意な増大が認められた.また,血清中の種々のマーカーについてELISA法を用いて測定し,副作用の有無を調べたところ,非投与マウスと比べて大きな変化が認められず,副作用の少ないことが示唆された.これらの結果から,sgRNAの動物個体レベルへの応用の可能性が大きく広がった.

GSK - 3 beta を inhibit さ せ Wnt シ グ ナ リ ン グ を activeness さ せ る sgRNA の 2 '- O - methyl を the RNA synthesis し た. ま た, 2' 4 '- Bridged Nucleic Acid (LNA: Locked Nucleic Acid) を い く つ か の salt base に scions into し た kind 々 の 2 '- O - メ チ ル を the RNA synthesis し た. こ れ ら の sgRNA を, 293 cells, MC3T3 E1 cells, CH310T1/2 cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し て, リ ア ル タ イ ム rt-pcr method, Western Blot method な ど に よ り, bone bud cells の の index と な る mRNA 発 now な ど に and ぼ す influence を adjustable べ た. LNA salt base を scions into す る こ と に よ っ て, ノ ッ ク ダ ウ ン unseen fruit が ど の よ う に - わ る か に つ い て detailed に adjustable べ た と こ ろ, あ る parts へ の LNA salt base の scions into は ノ ッ ク ダ ウ ン unseen fruit を raised large さ せ る こ と が Ming ら か に な っ た. さ ら に, living, 6 と い っ た a locked nucleic acid に 応 answer す る を interface by let body し た イ ン タ ー フ ェ ロ ン induced に つ い て を ELISA method with い て adjustable べ た と こ ろ, interferons alpha の produce は recognize め れ ず, hazardous が な い こ と が exam え ら れ た. マ ウ ス individual に zenograft に よ っ て sgRNA を cast with す を る department establish し た. HL60 cells を こ の way に よ り cast with し て swollen sores の form が recognize め ら れ た. こ の マ ウ ス に sgRNA を cast with す る と swollen sores の raised large の reduce が recognize め ら れ, the in vivo で, sgRNA の unseen fruit が Ming ら か に な っ た. こ れ ま で に in Vitro で unseen fruit が recognize め ら れ た sgRNA を マ ウ ス に bureau な ら び に body shots and し た. PQCT を with い て, こ の マ ウ ス の bone mass な ら び を に bone formation quantity determination し た と こ ろ, bone mass の intentionally な raised large が recognize め ら れ た. ま た, serum の kind 々 の マ ー カ ー に つ い て を ELISA method with い て し, vice In の presence of を べ た と こ ろ, cast and マ ウ ス と than べ て big き な variations change が recognize め ら れ ず, less side effects の な い こ と が in stopping さ れ た. こ れ ら の results か ら, sgRNA の individual animals レ ベ ル へ の 応 with の が likely き く hiroo が っ た.

项目成果

骨におけるWntシグナリングとsgRNA/tRNaseZ法による遺伝子発現制御法

使用 sgRNA/tRNaseZ 方法的骨中 Wnt 信号传导和基因表达控制方法

• 发表时间: 2006
• 期刊: 北海道歯学雑誌 26・1
• 作者: Ikeda F.;Nishimura R.;Matsubara T.;Tanaka S.;Inoue J.;Reddy S.V.;Hata K.;Yamashita K.;Hiraga T.;Watanabe T.;Kukita T.;Yoshioka K.;Rao A.;Yoneda T.;中島愛子
• 通讯作者: 中島愛子

Gene silencing by the tRNA maturase tRNase ZL under the direction of small-guide RNA

• DOI: 10.1038/sj.gt.3302841
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: GENE THERAPY
• 影响因子: 5.1
• 作者: Nakashima, A.;Takaku, H.;Nashimoto, M.
• 通讯作者: Nashimoto, M.

ヒトBcl-2 mRNAを標的とする裸のRNA heptamerによるアポトーシスの誘導

裸露 RNA 七聚体靶向人 Bcl-2 mRNA 诱导细胞凋亡

• 发表时间: 2009
• 作者: Nakashima;A.;中島愛子;高橋昌幸
• 通讯作者: 高橋昌幸

Regulation of matrix metalloproteinase-13 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 gene expression by WNT3A and bone morphogenetic protein-2 in osteoblastic differentiation.

• DOI: 10.2741/1912
• 发表时间: 2006-05
• 期刊: Frontiers in bioscience : a journal and virtual library
• 作者: Aiko Nakashima;Masato Tamura

Role of the Wnt signaling pathway in bone and tooth.

• DOI: 10.2741/e201
• 发表时间: 2010-06
• 期刊: Frontiers in bioscience
• 作者: M. Tamura;E. Nemoto;Mari Sato;Aiko Nakashima;H. Shimauchi