ユビキチン-プロテアソームシステムによるタンパク質分解とDNA修復の機構解明

阐明泛素-蛋白酶体系统蛋白质降解和 DNA 修复的机制

• 批准号: 06J04268
• 负责人: 曽根 孝之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J04268/
• 关键词: プロテアソーム; タンパク質分解; DSS1; Sem1; BRCA2; DNA修復; RAD51; たんぱく質分解

プロテアソームは細胞内に存在する巨大なタンパク質分解酵素複合体であり、ユビキチン依存的にタンパク質を分解する。すでに、酵母26Sプロテアソームの新規サブユニットとしてSem1を同定し、また、Sem1のヒトホモログDSS1もヒト26Sプロテアソームのサブユニットであることを明らかにしている。一方、DSS1は腫瘍抑制遺伝子産物BRCA2に結合して二本鎖DNA損傷修復機構に関与していると報告されている。即ち、DSS1はBRCA2と26Sプロテアソームの二つの複合体に含まれ、両者は密接に関連していると考えられる。本研究は、DSS1/Sem1がプロテアソームのサブユニットとして、DNA修復に関係するBRCA2とどのような分子様式で関連しているかを解明することを目的としている。DSS1/Sem1を中心として、プロテアソームおよびBRCA2との相互作用を分子レベルで解析した。そして、酵母two-hybrid法の応用により、DSS1/Sem1がプロテアソームサブユニットとBRCA2を繋ぐアダプター分子となり得ることを明らかにした。また、プロテアソームサブユニットRPN11とFLAGとの融合蛋白質RPN11-FLAGのHeLa細胞・安定発現株を用い、アフィニティー精製によりヒト26Sプロテアソームを完全な状態で精製し、BRCA2とRAD51が結合していることを発見した。さらに、マウスの各組織において、DSS1が他のプロテアソームサブユニットと共存することを見出した。ヒト26SプロテアソームとRAD51との結合はDSS1のノックダウンによって減少したことから、RAD51のプロテアソームへの結合はDSS1を介していると推察される。なお、この結合はマイトマイシンCによるDNA損傷時においても変化がなった。これらのことからRAD51は恒常的にDSS1を介してプロテアソームに結合していると考えられる。

A large number of enzyme complexes exist in the cell, and the enzyme complexes are dependent on the enzyme. The new rules for the 26S platform are set at the same time as those for the Sem1 platform, and the DSS1 platform for the 26S platform is set at the same time. One side, DSS1, tumor suppressor gene product BRCA2, binds to two essential DNA damage repair mechanisms. That is, DSS1 and BRCA2 and 26S are closely related to each other. The purpose of this study is to clarify the molecular relationship between DSS1/Sem1 and BRCA2. DSS1/Sem1 interaction molecular analysis DSS1/Sem1 is the first choice for the two-hybrid method, and BRCA2 is the first choice for the two-hybrid method. The fusion protein RPN11-FLAG was purified from HeLa cells in a complete state, and the fusion protein RPN11-FLAG was purified from BRCA2-RAD51. All the organizations in the world, including DSS1, have been working together for a long time. The RAD51 and RAD26S combinations are reduced by the DSS1 application, and the RAD51 and RAD26S combinations are promoted by the DSS1 application. When the DNA is damaged, it will be destroyed. The RAD51 is a constant DSS1.