ユビキチン-プロテアソームシステムによるタンパク質分解とDNA修復の機構解明

阐明泛素-蛋白酶体系统蛋白质降解和 DNA 修复的机制

• 批准号: 06J04268
• 负责人: 曽根 孝之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J04268/
• 关键词: プロテアソーム; タンパク質分解; DSS1; Sem1; BRCA2; DNA修復; RAD51; たんぱく質分解

プロテアソームは細胞内に存在する巨大なタンパク質分解酵素複合体であり、ユビキチン依存的にタンパク質を分解する。すでに、酵母26Sプロテアソームの新規サブユニットとしてSem1を同定し、また、Sem1のヒトホモログDSS1もヒト26Sプロテアソームのサブユニットであることを明らかにしている。一方、DSS1は腫瘍抑制遺伝子産物BRCA2に結合して二本鎖DNA損傷修復機構に関与していると報告されている。即ち、DSS1はBRCA2と26Sプロテアソームの二つの複合体に含まれ、両者は密接に関連していると考えられる。本研究は、DSS1/Sem1がプロテアソームのサブユニットとして、DNA修復に関係するBRCA2とどのような分子様式で関連しているかを解明することを目的としている。DSS1/Sem1を中心として、プロテアソームおよびBRCA2との相互作用を分子レベルで解析した。そして、酵母two-hybrid法の応用により、DSS1/Sem1がプロテアソームサブユニットとBRCA2を繋ぐアダプター分子となり得ることを明らかにした。また、プロテアソームサブユニットRPN11とFLAGとの融合蛋白質RPN11-FLAGのHeLa細胞・安定発現株を用い、アフィニティー精製によりヒト26Sプロテアソームを完全な状態で精製し、BRCA2とRAD51が結合していることを発見した。さらに、マウスの各組織において、DSS1が他のプロテアソームサブユニットと共存することを見出した。ヒト26SプロテアソームとRAD51との結合はDSS1のノックダウンによって減少したことから、RAD51のプロテアソームへの結合はDSS1を介していると推察される。なお、この結合はマイトマイシンCによるDNA損傷時においても変化がなった。これらのことからRAD51は恒常的にDSS1を介してプロテアソームに結合していると考えられる。

プ ロ テ ア ソ ー ム は に exists in cells す る huge な タ ン パ ク qualitative decomposition enzyme complex で あ り, ユ ビ キ チ ン dependent に タ ン パ ク qualitative を decomposition す る. 26 s プ す で に, yeast ロ テ ア ソ ー ム の new rules サ ブ ユ ニ ッ ト と し て Sem1 を with し, ま た, Sem1 の ヒ ト ホ モ ロ グ DSS1 も ヒ ト 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の サ ブ ユ ニ ッ ト で あ る こ と を Ming ら か に し て い る. One side, the product BRCA2 of the 伝 offspring of the DSS1 <s:1> abscess inhibitor, combined with the report of the <s:1> て DNA damage repair agency に and the <s:1> て ると ると ると report. Namely ち, DSS1 は BRCA2 と 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の two つ の complex に containing ま れ, struck は contact に masato even し て い る と exam え ら れ る. This study は, DSS1 / Sem1 が プ ロ テ ア ソ ー ム の サ ブ ユ ニ ッ ト と し て, DNA repair に masato is す る BRCA2 と ど の よ う な molecular others type で masato even し て い る か を interpret す る こ と を purpose と し て い る. DSS1 / Sem1 を center と し て, プ ロ テ ア ソ ー ム お よ び BRCA2 と の を molecular interaction レ ベ ル で parsing し た. そ し て, yeast two hybrid method の 応 with に よ り, DSS1 / Sem1 が プ ロ テ ア ソ ー ム サ ブ ユ ニ ッ ト と BRCA2 を 繋 ぐ ア ダ プ タ ー molecular と な り have る こ と を Ming ら か に し た. ま た, プ ロ テ ア ソ ー ム サ ブ ユ ニ ッ ト RPN11 と FLAG と の fusion protein RPN11 - FLAG の HeLa, settle 発 strains を い, now ア フ ィ ニ テ ィ ー refined に よ り ヒ ト 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム を な state completely で refined し, BRCA2 と RAD51 が combining し て い る こ と を 発 see し た . さ ら に, マ ウ ス の organizations に お い て, DSS1 が he の プ ロ テ ア ソ ー ム サ ブ ユ ニ ッ ト と coexistence す る こ と を shows し た. ヒ ト 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム と RAD51 と の combining は DSS1 の ノ ッ ク ダ ウ ン に よ っ て reduce し た こ と か ら, RAD51 の プ ロ テ ア ソ ー ム へ の combining は DSS1 を interface し て い る と push examine さ れ る. When なお and <s:1> <s:1> are combined with なお, ト, ト, シ, シ, and CによるDNA is damaged, にお, にお, て, て will change to がなった. こ れ ら の こ と か ら RAD51 は constant に DSS1 を interface し て プ ロ テ ア ソ ー ム に combining し て い る と exam え ら れ る.