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プロテオーム創薬に叶う機能性人工蛋白質の創製とそのDDSへの展開

适用于蛋白质组药物发现的功能性人工蛋白的创建及其在 DDS 中的应用

基本信息

批准号：
06J09131
负责人：
阿部康弘
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

疾患プロテオミクスの進展も相俟って、ポストゲノム研究によって同定された「疾患の治癒に関わる蛋白質」を画期的医薬品として適用した蛋白療法の確立が待望されている。これまでに私は、蛋白性医薬品による疾病治療の最適化を目指し、独自のファージ表面提示法を駆使することで、医薬価値に優れた様々な機能性人工蛋白質を創製してきた(BBA-Proteins and Proteomics,2007)。本年度は、これら本方法の更なるシステムアップを目的にペプチドライブラリへの展開を図り、細胞内へと侵入する機能を有する新規ペプチドの単離・同定に成功した(Pharmazie,2007)。一方で、昨年度から引き続き、抗腫瘍サイトカインとして見出された腫瘍壊死因子(TNF)の安全性・有効性の向上を目的に、2種類あるレセプター(TNFR1、TNFR2)のうちTNFR1選択的に結合するリジン欠損TNF変異体の作製を試みている。昨年度の研究より得られたTNFR1指向性変異体の候補蛋白質を作製し、各レセプターに対する結合力・生物活性を詳細に評価したところ、最もレセプター選択性に優れたTNFR1指向性アゴニストである4-1Bを見出した。なお、TNFR2を介した生物活性を評価するために、新たな評価系を作製することにも成功している(J Immunol Methods,in press)。続いて、4-1Bの生体内安定性を高める目的でN末端部位特異的バイオコンジュゲーションを試みた。修飾高分子として分子量5000のポリエチレングリコール(PEG)を選択し、種々バイオコンジュゲーション条件の最適化することで、野生型TNFと比較して活性低下を伴うことなくバイオコンジュゲート化可能であることが判明した。さらには、"ファージ表面提示法駆使した新規機能性蛋白質創製システム"を用いることで、TNFR1指向性アゴニストに限らず、TNFR1に選択的に結合するが、活性を示さないTNFR1指向性アンタゴニストの創製にも成功した(J Biol Chem,2008)。本システムで得られた機能性TNF変異体の構造-活性相関研究を通じてプロテオーム創薬のためのバイオインフォマティクス構築にも大きく貢献できるものと期待される。

The progress of disease prevention and treatment is expected to be completed in the future. The aim of this study is to optimize the treatment of diseases with protein-based drugs, and to create functional artificial proteins by independent surface cueing methods (BBA-Proteins and Proteomics,2007). This year, the method was successfully modified for the purpose of developing new cell types, cell types, and cell invasion functions (Pharmazie,2007). The safety and effectiveness of tumor necrosis factor (TNF) have been studied in two aspects: TNFR1, TNFR2 and TNFR1. A detailed evaluation of TNFR1-directed protein binding activity was conducted. TNFR2-mediated biological activity was evaluated successfully (J Immunol Methods,in press). The stability of 4-1B in vivo was high, and the N-terminal site-specific protein was tested. The modified polymer has a molecular weight of 5000 and a molecular weight of 5000. The modified polymer has a molecular weight of 5000. In addition, the "surface cue method" has been successfully used to create functional protein systems, and TNFR1-directed protein systems have been successfully created (J Biol Chem,2008). This article describes the structure and activity of functional TNF isoforms and their contribution to the development of TNF.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Simple and highly sensitvie assay system for TNFR2-mediated soluble-and transmembrane-TNF activity

简单且高灵敏度的 TNFR2 介导的可溶性和跨膜 TNF 活性测定系统

DOI：
发表时间：
期刊：
J Immunol Methods (in press)
影响因子：
0
作者：
Abe Y.;Yoshikawa T.;Kamada H.;Shibata H.;Nomura T.;Minowa K.;Kayamuro H.;Katayama K.;Miyoshi H.;Mukai Y.;Yoshioka Y.;Nakagawa S.;Tsunoda S.;Tsutsumi Y.
通讯作者：
Tsutsumi Y.

Role of amino acid residue 90 in bioactivity and receptor binding capacity of tumor necrosis factor mutants

氨基酸残基90在肿瘤坏死因子突变体生物活性和受体结合能力中的作用

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
BBA-Proteins and Proteomics 1774(8)
影响因子：
0
作者：
Shibata H.;Kamada H.;Nishibata K.;Yoshioka Y.;Nishibata T.;Abe Y.;Nomura T.;Nabeshi H.;Minowa K.;Mukai Y.;Nakagawa S.;Mayumi T.;Tsunoda S.;Tsutsumi Y.
通讯作者：
Tsutsumi Y.

創薬プロテオミクスの実現に叶う機能性人工蛋白質の迅速創出技術の開発

开发功能性人工蛋白快速创造技术，实现药物发现蛋白质组学

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
阿部康弘;向洋平;角田慎一;中川晋作;堤康央
通讯作者：
堤康央

Creation of novel protein transduction domains (PTDs) under phage display system-based high-throughput screening methods.

在基于噬菌体展示系统的高通量筛选方法下创建新型蛋白质转导域（PTD）。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Biol Pharm Bull 29(8)
影响因子：
0
作者：
Mukai Y;Sugita T;Yamato T;Yamanada N;Shibata H;Imai S;Abe Y;Nagano K;Nomura T;Kamada H;Nakagawa S;Tsutsumi Y;Tsunoda S.
通讯作者：
Tsunoda S.

Optimization of anti-tumor necrosis factor-α single chain Fv displayed on phages for creation of functional antibodies.

优化噬菌体上展示的抗肿瘤坏死因子-α 单链 Fv，用于创建功能性抗体。

DOI：
发表时间：
期刊：
Pharmazie (in press)
影响因子：
0
作者：
Mukai Y;Okamoto T;Kawamura M;Shibata H;Sugita T;Imai S;Abe Y;Nagano K;Nomura T;Kamada H;Tsutsumi Y;Mayumi T;Nakagawa S;Tsunoda S.
通讯作者：
Tsunoda S.