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絶滅危惧種スナヤツメの保護に関する研究

濒危沙七鳃鳗的保护研究

基本信息

批准号：
06J40022
负责人：
山崎輝美 (長井輝美)
金额：
$ 1.41万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1)スナヤツメ北方種の産卵期(12〜2月)に人工授精を行い、飼育方法を検討した。スナヤツメの餌として、生息地に繁茂する水草を人工的に発酵させたものを初期餌料として与えた。この餌料を与えることにより、初期の生残率の低下を食い止めることができた。これらの個体群は現在(受精後4か月)も生存し、飼育下にある。2)低濃度のトリプシン溶液を先に作用させて卵膜の外側を膨潤、溶解後に孵化溶液を作用させたところ、作用後2-3時間で孵化時同様に卵膜の一部が溶解し、更に3時間後にはピンセットで容易に外せるほどに卵膜が柔軟化した。卵膜除去された胚は、1/10steinberg液で培養し孵化期までの生存が可能であった。3)スナヤツメ精子の凍結保存は、ドジョウで用いられている方法(Yasui et al.,2008)を参照して行った。その結果、メタノールを用いた群は、ドライアイス内で最長1分の保存までしか精子の活性が認められなかった。一方凍害阻害剤としてDMSOをもちいた群は、ドライアイス内で2分以上保存しても精子の活性が認められたが、直後に液体窒素に保存すると活性が認められなくなった。現在、凍害阻害剤としてグリセロールとウシ胎児血清(FBS)を検討中である。4)スナヤツメ北方種の成熟卵巣よりtotal RNAを抽出し、様々な生物種に共通して存在する生殖細胞因子についてdegenerate PCRを行った。その結果、生殖細胞因子と思われる明瞭なバンドが得られたため、現在このバンドから得られたDNAをシークエンス解析しているところである。

1) The spawning period of northern species (December to February) is discussed. Artificial insemination and breeding methods are discussed. The first stage of the game is to create a game. The feed rate is low at the initial stage. The individual population is now (4 months after fertilization) surviving and reared. 2)The egg membrane was swollen and dissolved by low concentration solution. After incubation, part of the egg membrane was dissolved 2-3 hours later. After incubation, the egg membrane was softened. The embryo is cultured in 1/10Steinberg solution without the egg membrane, and survival during the incubation period is possible. 3) The method of sperm freezing preservation (Yasui et al., 2008). The result is that the sperm activity is recognized by the longest preservation time within the range of 1 minute. The activity of sperm is preserved for more than 2 minutes in the presence of DMSO. Now, the damage resistance agent is in the process of being investigated. 4) Total RNA extracted from mature eggs of northern species and common reproductive factors present in biological species As a result, reproductive cytokines are thought to be the most important factor in the analysis of DNA.