植物の新規カルシウム結合タンパク質に関する生化学的・分子細胞生物学的研究

植物中新型钙结合蛋白的生化和分子细胞生物学研究

• 批准号: 06J50432
• 负责人: 長崎 菜穂子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J50432/
• 关键词: カルシウム結合タンパク質; 不規則構造タンパク質; PPIIヘリックス

RVCaB大腸菌発現系を用いてRVCaBを作製し、高純度標品を大量に精製した。これを用いて円二色性(CD)スペクトルと示差走査型熱量計(DSC)による解析を行い、RVCaBは約25%のPPII(polyploline type II)ヘリックス構造と75%の長大な不規則領域を含むきわめてユニークな分子であることを明らかにした。また、2種のTrp導入変異体2種を作製し、蛍光スペクトルと等温滴定型熱量計(ITC)を用いて解析を行った。これらの結果から、RVCaBのもつCa^<2+>の高結合能(22mol Ca^<2+>/mol RVCaB)はPPIIヘリックス構造と不規則領域によって成立していると推測した。(これらの結果については現在Journal of Biochemistryに投稿中である。)AtCaB4オルソログと考えられたAtCaB4については細胞膜への局在を明らかにした(Ide, Y. et al.(2006) J.Exp.Botany doi:10.,1093/jxb/erl284)。N末端にはミリストイル化シグナルと推測される配列が存在する。そこで,AtCaB4のN末端ペプチドとのGFP融合タンパクの一過的発現観察を行いNミリストイル化による細胞膜局在の可能性を強く示唆するデータが得られた。また,Ca^<2+>とCu^<2+>,ホスホイノシチドとの相互作用についても新たに見出した。さらに大腸菌発現系を用いてリコンビナントタンパクを作製し,高純度標品の大量精製系を確立した。これを用いたDSCとCDスペクトルによる解析より,RVCaBとは異なりαヘリックス構造と不規則構造を含むことを明らかにした。

The RVCaB strain of bacteria uses "RVCaB" as the standard and a large number of "fine" products of high quality. The differential measurement of dichroism (CD) and differential measurement (DSC) is used to analyze the data, and the RVCaB is about 25% PPII (polyploline type II). In the field, there are no rules in the field. The measurement of isothermal droplet setting (ITC) is used to analyze the data of the isothermal droplet measurement (ITC), which is used in the measurement of isothermal droplets. In the results of the experiment, RVCaB CAC ^ & lt;2+> High Energy combined Energy (22mol Ca ^ & lt;2+>/mol RVCaB) PPII energy generation system does not rule the field system to establish a high energy efficiency system. (the results show that you are now in the Journal of Biochemistry submission.) AtCaB4