Structural analysis of nylon oligomer hydrolase and application to enzymatic synthesis of unnatural amides

尼龙低聚物水解酶的结构分析及其在非天然酰胺酶法合成中的应用

• 批准号: 18360400
• 负责人: NEGORO Seiji
• 金额: $ 11.64万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18360400/
• 关键词: ナイロンオリゴマー; X線結晶構造解析; 酵素進化; βラクタマーゼ; カルボン酸エステル分解酵素; Arthrobacter; 6-アミノカプロン酸; 6-Aminohexanoate oligomer; ナイロンオリゴマー分解酵素; アミド合成; 耐熱性酵素; N-terminal nucleophile hydrolase; maloamidase; 6-Aminohexanoate-cyclic dimer; Agromyces; Kokuria; 6-aminoh

Arthrobacter sp.strain KI72 produces NylB' carboxylesterase, which is 88% homologous to functional nylon oligomer hydrolase (NylB). Both NylB and NylB' utilize Ser112-Lys115-Tyr215 residues as catalytic triads. NylB' possesses approximately 0.5% of the level of the 6-aminohexanoate linear dimer (Ald)-hydrolytic activity of NylB. Three substitutions (G181D, H266N and D370Y) in NylB'-type carboxylesterase were sufficient to increase the level of the Ald-hydrolytic activity to that of the wild-type NylB enzyme. The triple mutant efficiently catalyzed the amide-synthetic reaction in organic solvent containing low concentration of water by reverse reaction of hydrolysis. We analyzed the structural requirements of the enzymes for effective amide-synthetic reaction.

Arthrobacter sp.srain ki72产生尼尔布羧酸酯酶，它与功能性尼龙低聚物水解酶（NYLB）同源88％。 Nylb和Nylb'均用Ser112-Lys115-Tyr215残基作为催化三合会。 NYLB'拥有6-氨基己酸盐线性二聚体（ALD） - 液化活性的约0.5％。尼尔布型羧酸酯酶中的三个取代（G181D，H266N和D370Y）足以将ALD氢化液的水平提高到野生型NYLB酶的水平。三重突变体有效地催化了通过水解的反反应，在有机溶剂中含有含有低浓度水的有机溶剂反应。我们分析了酶对有效酰胺合成反应的结构要求。

项目成果

Molecular design of a nylon-6 byproduct-degrading enzyme from a carboxylesterase with a βlactamase fold.

来自具有 β 内酰胺酶折叠的羧酸酯酶的尼龙 6 副产物降解酶的分子设计。

• 发表时间: 2009
• 期刊: FEBS J. 276
• 作者: Kawashima Y. Ohki T. Shibata N. Higuchi Y;Takeo M;Kato D;Negoro S.
• 通讯作者: Negoro S.

ナイロンオリゴマー分解酵素の実験室内進化 : 触媒中心形成の構造基盤

尼龙低聚物降解酶的实验室进化：催化中心形成的结构基础

• 发表时间: 2008
• 作者: 大木卓;柴田直樹;武尾正弘;加藤太一郎;樋口芳樹;根来誠司
• 通讯作者: 根来誠司

Molecular design of a nylon-6 byproduct-degrading enzyme from acarboxylesterase with a β-lactamase fold.

来自具有 β-内酰胺酶折叠的羧酸酯酶的尼龙 6 副产物降解酶的分子设计。

• 发表时间: 2009
• 期刊: FEBS Journal 276
• 作者: Kawashima;Y. Shibata;N.;Takeo;M.;Kato;D. Negoro;S.
• 通讯作者: S.

6-アミノカプロン酸環状2量体加水分解酵素・基質複合体のX線結晶構造解析

6-氨基己酸环状二聚体水解酶/底物复合物的 X 射线晶体结构分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 安平 健吾;柴田 直樹;門上 剛;樋口 芳樹;加藤 太一郎;武尾 正弘;根来 誠司
• 通讯作者: 根来 誠司

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