胞子体世代の初期発生遺伝子から探る、陸上植物の世代交代進化機構の解明

阐明陆地植物世代交替的进化机制，探索孢子体世代的早期发育基因

• 批准号: 18770069
• 负责人: 棚橋 貴子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: National Institute for Basic Biology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770069/
• 关键词: LFY遺伝子; ヒメツリガネゴケ; ChIP; null変異体; PpLFY1抗体

一過的な遺伝子発現の影響を見るためにPpLFY1遺伝子のnu11変異体の作出を進めた。PpLFY1遺伝子のコード領域を薬剤耐性を付与するハイグロマイシンカセットで置き換えたコンストラクトを作製して、PEG法でヒメツリガネゴケに導入した。しかしこのコンストラクトは狙い通りにゲノムDNA領域に挿入された場合でも、形質転換体はハイグロマイシンを含む培地での生育が非常に悪い事が分かった。形質転換体は緑色はとどめていて死滅はしないが、大部分のものが数細胞の段階で成長がほぼ止まっていて、コロニーサイズが大きくならなかった。そこで形質転換体をハイグロマイシンフリーの培地に移植して解析を進めた。原糸体の段階では生育が悪い事を除けば野生株と比べて顕著な形態異常は観察されなかった。以前に作製した、PpLFY1遺伝子のコード領域中にハイグロマイシンカセットを挿入した変異体では、胞子体の形成に異常が見られたので、今回作出したnu11変異体もさらに先の発生段階まで観察を進める予定である。またPpLFY1遺伝子の標的遺伝子を同定するためのChIP実験のために、PpLFY1遺伝子の抗体が必要となる。抗原としてHisタグ組換えタンパク質を用いることとし、それを大腸菌で発現させて、抗原の精製を行った。組換えタンパク質の発現条件を最適化して効率よく抗原を回収しようと試みたが収量の大幅な増加は難しかったので、実験を繰り返す事で必要な量の抗原を集めた。

A passing な 伝子発 appear の impact を see る た め に PpLFY1 伝子 の nu11 変 variant の 出 を 入 め た. PpLFY1 legacy 伝子のコード区を薬剤patienceをgivenするハイグロマイシンカセットThe でSETきchanged the えたコンストラクトをproduced the して, the PEG method でヒメツリガネゴケに imported the した.しかしこのコンストラクトは窄通りにゲノムDNA field にINSERT されたoccasionでも, form and substance change body はハイグロマイシンを椀地での生が very にい事が分かった. Morphological change body green color green color death death color, most of the number of cellsの级でgrowthがほぼ出まっていて、コロニーサイズが大きくならなかった.そこでmorphosis change body をハイグロマイシンフリーの平地に transplantation してanalytic を入めた. The original stage of the disease is the elimination of wild strains and abnormal morphology. In the past, it was made by した, and PpLFY1's remaining 伝子のコード in the field of にハイグロマイシンカセットをinsert した変variant では, sporozoiteの Formation of abnormality が见られたので、This time I made したnu11変variant もさらに前の発生stepstage まで観看を进めるpredetermined である.またPpLFY1 伝子の名的伝子を同定するためのChIP実験のために, PpLFY1 伝子のantibodies となる. Antigen としてHisタグ group replacement いることとし, それを coliform で発成させて, antigen のrefined を行った. Replacement of quality and conditions, optimization of efficiency, recovery of antigen, test of recovery The amount of large increase is difficult, the amount of antigen is necessary, and the amount of antigen is necessary.