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tRNAチオ化修飾経路における硫黄転移反応メカニズムの解明

阐明tRNA硫醇化途径中的硫转移反应机制

基本信息

批准号：
18770082
负责人：
沼田倫征
金额：
$ 2.37万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (2007)Tokyo Institute of Technology (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

tRNAアンチコドン一文字目の塩基修飾は,コドンの適正な縮重を制御しており,正確なタンパク質合成にとって重要である。グルタミン酸,リジン,グルタミンをコードするtRMのアンチコドン1文字目のウリジンは,全ての生物種において修飾を受け2-チオウリジンとなる。アンチコドン1文字目のウリジンに導入される硫黄はシステインに由来しており,反応性に富む過硫化硫黄中間体となって硫黄リレータンパク質(IscS,TusA,TusBCD,TusE)を移動し,tRNAチオ化修飾酵素であるMhmAに引き渡される。本研究では,tRMへの硫黄転移反応を解明するために,IscS-TusA複合体,TusA-TusBCD複合体,TusBCD-TusE-MnmA複合体,TusE-MnmA-tRNA複合体の結晶構造解析を目指している。これまでに,IscS,TusA,TusBCD,TusE,MnmAの大腸菌を用いた大量発現・精製系,およびT7 RNAポリメラーゼを用いたin vitroにおけるtRNAの大量調製系を構築し,それぞれの複合体の結晶化条件の初期スクリーニングを行った。現在までに,いくつかの複合体に関して予備的な結晶を得ており,現在,結晶化条件の最適化を行っているところである。TusE-MnmA-tRNAからなる三者複合体結晶については,大型放射光施設にて回折強度を測定し,分解能5Å程度の回折データを収集した。

The word "tRNA" is used to improve the quality of the system, and it is important to make sure that it is important to synthesize the information. There is no need to change the quality of the tRM. The text list of all biological species is not available, and the full range of biological species is affected. The reason for this is the origin of sulfur, sulfur, In this study, IscS-TusA complex, TusA-TusBCD complex, TusBCD-TusE-MnmA complex and TusE-MnmA-tRNA complex were analyzed by means of crystal analysis. A large number of fine strains were detected by using a large number of strains of IscS,TusA,TusBCD,TusE,MnmA bacteria, a large number of strains were detected by using T7 RNA cells, a large number of strains were detected by tRNA, and the crystallization conditions of the complex were analyzed in the early stage. At present, we have obtained the results of the complex. Now, the crystallization condition is the most effective. The complex of the three TusE-MnmA-tRNA devices is characterized by X-ray diffraction, the bending strength of the large-scale radiation equipment is measured, and the decomposition can be refolded to a high degree of 5 degrees.