ファージディスプレイ法によるメタロ-β-ラクタマーゼのペプチド阻害剤の網羅的探索
利用噬菌体展示法全面寻找金属-β-内酰胺酶肽抑制剂
基本信息
- 批准号:18790028
- 负责人:
- 金额:$ 2.11万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 2007
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
メタロ-β-ラクタマーゼ(MBL)であるIMP、 VIMは、活性中心にZn(II)イオンを含み、感染症治療で最も汎用されているβ-ラクタム剤を加水分解することで、細菌感染症治療を困難にさせる酵素である。しかしMBL阻害剤は未だ臨床に無く、その阻害剤開発が急がれている。本研究は、毒性が低いと考えられるペプチドを基盤としたIMPおよびVIMのリード化合物を網羅的に探索することで、迅速かつ定量的に阻害剤開発を行うことが目的である。平成19年度は、昨年度に続きMBLであるVIM-2の大量発現系の構築を行った。MBLであるIMP-1の大量発現系は確立している。VIM-2はクローニングされた際にベクターに存在していたownプロモータで発現させているため、酵素発現量が多くなく、非常に酵素精製に手間がかかる。しかし、VIM-2遺伝子を大量発現系ベクターに組み込むとうまく発現しないことがわかった。これはVIM-2のフォールディングに問題があると考えられた。そこで効率よくVIM-2を大量に精製できるシステムを構築するために、アフィニティーカラムを利用した精製系やコールドショックによる発現系の構築を行った。現在、精製条件を検討中である。またファージディスプレイは、ペプチド直鎖型とペプチド湾曲型を考案している。ファージディスプレイ法を確実に行うために、ルシフェラーゼをファージのg3pと融合させファージ表面に提示させ、固相にルシフェラーゼ抗体を結合させ、ルシフェラーゼ提示型ファージを選択して抽出できる環境を整えた。
IMP, VIM, Zn (II), Zn (II), enzyme (enzyme) in the active center, treatment of infection, treatment of bacterial infection and bacterial infection. It is necessary to use MBL to prevent the operation of emergency beds, and to prevent the opening of emergency services. In this study, low toxicity tests have been conducted to determine the effectiveness of the chemical compound network of IMP, VIM, chemical compounds, rapid and quantitative detection of harmful substances. In Pingcheng 19 and last year, there were a large number of VIM-2 in the MBL market. A large number of MBL information IMP-1 is required to ensure the availability of information. VIM-2 is sensitive to the use of high concentration of enzymes, such as the concentration of enzymes, and the concentration of enzymes in the hand. there is a positive correlation between the concentration of enzymes, the concentration of enzymes and the concentration of enzymes. There is a lot of information about the number of people in the VIM-2 system. This is the most important thing in the world. Please VIM-2 your questions. Please do not know how to do this. There is a lot of information about the rate of VIM-2. There is a lot of information about the system. At present, we are in a state of concern in terms of conditions. I don't know. I don't know what to do. This method is used to determine the accuracy of G3P fusion test, solid phase detection, antibody detection and extraction of the environmental protection device.
项目成果
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