炎症細胞特異的な遺伝子送達を目指した遺伝子キャリアーの創製

创建用于炎症细胞特异性基因传递的基因载体

• 批准号: 18790123
• 负责人: 浅井 大輔
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: St.Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790123/
• 关键词: IkappaB kinase; NF-kappaB; 遺伝子キャリアー; 遺伝子デリバリー; ドラッグデリバリー; 遺伝子治療

前年度に調製した高分子について下記の評価およびフィードバックを実施した。培養細胞での評価高分子-pDNA複合体を複数種の培養細胞ヘマイクロインジェクション法により導入し、炎症性サイトカインで細胞を刺激して、高分子の遺伝子発現制御能を調べたところ、RAW264.7、NIH3T3、HeLa細胞において炎症性サイトカイン刺激依存的な遺伝子発現が認められた。この現象は陰性コントロール高分子では見られなかった。これより、試験管内および培養細胞レベルにおける炎症性サイトカイン刺激に応じた遺伝子発現制御システムが確実なものとなった。一方、上述の試作型高分子を用いて得られた結果をフィードバックして高分子に改良を加え、新たに複数種の機能性高分子を設計・合成した。新たな機能修飾インテグリンに着目しその認識配列Arg-Gly-Aspペプチドをリガンドとしてポリマーに導入した。まずはプロテインキナーゼA (PKA)の系で評価したところ細胞内導入効率の向上が認められた。すなわち、Folskolin刺激によりPKAを活性化させると有意にレポーター遺伝子の発現上昇が認められた。現在、IKKβの系についても進めておりPKA応答型ポリマーと同様の効果が期待される。膜透過性ペプチドHIV-1 Tatによりポリマーを修飾し、DNA-ポリマー複合体の細胞導入を試みた。オクタグルタミン酸(E8)でHIV-l Tatのカチオン荷電を相殺した形式荷電ゼロのE8-Tatを設計・合成してポリマーに導入した。しかしながら細胞導入試験の結果、有意なレポーター遺伝子の発現は認められなかった。昨年12月にHIV Tatペプチドの細胞移行に関するメカニズムが報告された(Proc Natl Acad Sci USA., 104,20805-20810(2007))。この報告は、今回申請者の設計したペプチドにはHIV Tat部と基質部のリンカーの延長といった具体的な改良点を明確に示唆した。

The previous year 's に modated た polymer に て て て the following notes and comments 価およびフィ ドバッ ドバッ を を implementation た た. Culture cell で の review 価 を plural kinds of composite polymer - pDNA の culture cell ヘ マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン method に よ り import し, inflammatory サ イ ト カ イ ン を で cells stimulate し て, polymer の heritage 伝 son 発 now suppression to を べ た と こ ろ, RAW264.7, NIH3T3, HeLa に お い て inflammatory サ イ ト カ The な offspring of な dependent stimulation 伝 exhibit が recognition められた. The <s:1> <s:1> phenomenon is <s:1> negative and コ トロ トロ トロ トロ られな macromolecules で で see られな られな った った. こ れ よ り, test tube お よ び culture cell レ ベ ル に お け る inflammatory サ イ ト カ イ ン stimulus に 応 じ た posthumous son 伝 発 now suppression シ ス テ ム が indeed be な も の と な っ た. One party, the above の test for type polymer を い て have ら れ た results を フ ィ ー ド バ ッ ク し て polymer modified を に え, new た に plural kinds of の functional polymer を design, synthesis し た. New た な function modified イ ン テ グ リ ン に with mesh し そ の meet with column Arg Gly - Asp ペ プ チ ド を リ ガ ン ド と し て ポ リ マ ー に import し た. ま ず は プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ A (PKA) の で review 価 し た と こ ろ cells into sharper rate の が upward to recognize め ら れ た. す な わ ち, Folskolin stimulation に よ り PKA を activeness さ せ る と intentionally に レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 の 発 now rising が recognize め ら れ た. Now, the IKKβ <s:1> system に に に て て て is combined into めてお <e:1> PKA応 answer type ポリ と と と the same effect is expected される. Membrane permeability ペ プ チ ド HIV - 1 Tat に よ り ポ リ マ ー を modified し, DNA - ポ リ マ ー complex の cells import を try み た. オ ク タ グ ル タ ミ ン acid (E8) で HIV - l Tat の カ チ オ ン slay charged を し た form charged ゼ ロ の E8 - Tat を design, synthesis し て ポ リ マ ー に import し た. The results of the ながら cell introduction experiment, the intention of なレポ タ タ タ 伝 offspring 伝, the occurrence of った confirmation められな った った った. In December last year に HIV Tat ペ プ チ ド の cell migration に masato す る メ カ ニ ズ ム が report さ れ た (Proc by Natl Acad Sci USA., 104208, 05-20810 (2007)). は こ の report, today back to the applicant の design し た ペ プ チ ド に は HIV Tat department と matrix department の リ ン カ ー の extended と い っ た specific を な improvement point clear に shown sucking し た.

项目成果

Role of plasma as activator an cofactor in phosphorylation catalyzed by protein kinase C.

血浆作为蛋白激酶 C 催化的磷酸化中的激活剂和辅助因子的作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Cell Biochem Funct. (in press)
• 作者: Kang JH;et al.
• 通讯作者: et al.

細胞内プロテインキナーゼCα応答型遺伝子制御システムの開発とガン特異的診断

细胞内蛋白激酶Cα响应基因调控系统的开发和癌症特异性诊断

• 发表时间: 2007
• 作者: 姜貞勲;ほか
• 通讯作者: ほか

ウイルスプロテアーゼ応答型新規遺伝子キャリア

病毒蛋白酶响应的新型基因载体

• 发表时间: 2007
• 作者: 倉本政則;ほか
• 通讯作者: ほか

IκBキナーゼペプチド応答性ペプチド担持ポリマーを用いた遺伝子デリバリー

使用 IκB 激酶肽响应肽携带聚合物进行基因递送

• 发表时间: 2007
• 作者: 土谷享;ほか
• 通讯作者: ほか

Novel peptide is a protein kinase C(PKC)α-specific substrate

新型肽是蛋白激酶 C (PKC)α 特异性底物

• 发表时间: 2008
• 期刊: Proteomics (印刷中)
• 作者: J-H. Kang;et. al.
• 通讯作者: et. al.