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容積感受性外向き整流性クロライドチャネルの分子同定

体积敏感的外向整流氯离子通道的分子鉴定

基本信息

批准号：
18790165
负责人：
LEE Elbert
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790165/
关键词：
細胞生理学チャネル

项目摘要

本研究課題は、容積感受性外向整流性アニオンチャネル(VSOR)、あるいはその調節因子の分子を同定することを目的にしていた。KB上皮型癌細胞株においてVSORの機能的発現が見られるのに、KB由来のKCP・4シスプラチン耐性細胞株において見られないことが分かったので、まず、はじめに、KCP-4細胞株でのVSOR機能欠落は遺伝子発現の変化によるものなのか否かを調べた。遺伝子発現の変化を起こすトリコスタチンAという試薬でKCP-4細胞を処理すると、VSOR機能の部分的回復が見られたので、機能欠落が遺伝子発現の変化に起因していることが強く示唆された(Lee et al., 2007)。次に、遺伝子マイクロアレイでKB細胞株とKCP-4細胞株の発現遺伝子を比較した。それぞれの細胞株からRNAを抽出・精製し、蛍光ラベルcRNAプローブを作製した後、プローブをAgilent社Whole Human Genomeオリゴマイクロアレイとハイブリダイゼーションをしてマイクロアレイをスキャニングした。2つのカラースワップ実験を含めて4つの繰り返し実験を行った。マイクロアレイで調べた約40,000遺伝子転写物の中に、KB細胞株に比べてKCP-4細胞株において遺伝子発現量が5分の1以下に減少している遺伝子転写物が約400あるということが分かった。KB細胞において特定遺伝子をノックダウンしてVSOR機能への影響を調べるために、Invitrogen社pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRプラスミドベクターをもとに、RNA干渉を起こす発現プラスミドを作製した。作製したプラスミドをKB細胞にトランスフェクションをしてVSOR活性に変化があるか否かをホールセルパッチクランプ法で調べた。現在のところ、数遺伝子を調査したが、はっきりした変化を確認できなかった。今後、未調査のVSOR関連遺伝子候補を試す必要がある。

The subject of this research is the volume receptive outward rectifier (VSOR) and the molecular regulator of the volume receptive extrovert rectifier (VSOR). The function of KB epithelial cancer cell line VSOR VSOR appears and the origin of KB is KCP・4 シスプラチン resistant cell line において见られないことが分かったので, まず, はじめに, KCP-4 cell line でのV The function of the SOR is insufficient, and the remaining parts of the system have been changed. The test results of KCP-4 cell processing and VSOR function are as follows: Part of the reply: が见られたので、The cause of the lack of function and the reason why the function is not functioning properly していることが强くshows instigation された(Lee et al., 2007). Comparative analysis of the KB cell line and the KCP-4 cell line of the 2014-2011 1999 1998 study.それぞれの cell line からRNAを extraction and purification, 荍光ラベルcRNA プローブを production した后, プローブをAgilent Corporation Whole Human Genome オリゴマイクロアレイとハイブリダイゼーションをしてマイクロアレイをスキャニングした. 2つのカラースワップ実験を干めて4つの缲り回し実験を行った. About 40,000 マイクロアレイで片べた弝子転物の中に、KB cell strain に比べてKCP-4 cell strain にThe current amount of おいて伝子発 is 5 points or less and the reduction is 1 or less. The remaining 伝子転物 is about 400あるということが分かった. KB cell specific genetic code VSOR function VSOR function control system, Invitrogen company pcD NA6.2-GW/EmGFP-miR プラスミドベクターをもとに, RNA stemmed by こす発成プラスミドをproduced by した. Produced by KB cell VSO R-Active に変化があるか不かをホールセルパッチクランプ法で Adjustmentべた. Now it's time to investigate, and it's now confirmed. From now on, it is necessary to test candidates for candidates related to VSOR who have not yet been investigated.