アミラーゼの遺伝子発現の新規タイピング法の開発と腫瘍産生アミラーゼ解析への応用

アミラーゼ産生骨髄腫は髄外腫瘤を認め、速い経過で悪化する予後不良の骨髄腫である症例が多いと言われている。それが産生されたアミラーゼによるとは考えにくく、従ってアミラーゼを産生するメカニズムに悪性度を規定する、もしくは影響する要因が隠れていると考えられる。従って、アミラーゼ産生のメカニズムを調べることは癌の生物学的性状を明らかにすることにつながり、ひいては診療に役立つことが期待される。アミラーゼ産生骨髄腫が産生するアミラーゼは唾液型であるが、我々は独自に開発したRT-PCR-SSCP法を適用した発現プロファイリング法を使って調べたところ、確かに唾液型をコードするAMY1Aの遺伝子発現が元進していることをつきとめた。そこで、アミラーゼ産生骨髄腫細胞(株)KMS-12-PEと非産生株KMS-12BMを含め、種々の細胞株をメチル化阻害薬5aza-dC、脱アセチル化阻害薬Tricostatin Aを添加して培養し、AMY1Aの発現に変化が生じるかどうかを調べた。また、AMY1A遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化状態をsodiumbisulfite処理後のDNA塩基配列の変化をPCR-SSCP法、直接塩基配列決定によって調べたところ、アミラーゼ産生、非産生の細胞株、いずれもAMY1Aプロモーター領域はメチル化されており、メチル化阻害剤、脱アセチル化阻害剤を加えても、泌砂塀発現量に変化がみられなかった。従って、AMY1A遺伝子はもとより、他の転写因子などの制御遺伝子のメチル化・アセチル化も含めてアミラーゼ産生という表現型には関与していないと考えられた。今後は、microRNAによる制御系などについても検討していきたい。

アミラーゼ産生骨髄腫は髄外腫瘤を認め、速い経過で悪化する予後不良の骨髄腫である症例が多いと言われている。それが産生されたアミラーゼによるとは考えにくく、従ってアミラーゼを産生するメカニズムに悪性度を規定する、もしくは影響する要因が隠れていると考えられる。従って、アミラーゼ産生のメカニズムを調べることは癌の生物学的性状を明らかにすることにつながり、ひいては診療に役立つことが期待される。アミラーゼ産生骨髄腫が産生するアミラーゼは唾液型であるが、我々は独自に開発したRT-PCR-SSCP法を適用した発現プロファイリング法を使って調べたところ、確かに唾液型をコードするAMY1Aの遺伝子発現が元進していることをつきとめた。そこで、アミラーゼ産生骨髄腫細胞(株)KMS-12-PEと非産生株KMS-12BMを含め、種々の細胞株をメチル化阻害薬5aza-dC、脱アセチル化阻害薬Tricostatin Aを添加して培養し、AMY1Aの発現に変化が生じるかどうかを調べた。また、AMY1A遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化状態をsodiumbisulfite処理後のDNA塩基配列の変化をPCR-SSCP法、直接塩基配列決定によって調べたところ、アミラーゼ産生、非産生の細胞株、いずれもAMY1Aプロモーター領域はメチル化されており、メチル化阻害剤、脱アセチル化阻害剤を加えても、泌砂塀発現量に変化がみられなかった。従って、AMY1A遺伝子はもとより、他の転写因子などの制御遺伝子のメチル化・アセチル化も含めてアミラーゼ産生という表現型には関与していないと考えられた。今後は、microRNAによる制御系などについても検討していきたい。