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TP53遺伝子機能解析データベースを利用した抗癌剤感受性予測システムの開発

利用TP53基因功能分析数据库开发抗癌药物敏感性预测系统

基本信息

批准号：
18790441
负责人：
大塚和令
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790441/
关键词：
消化器学 TP53遺伝子抗癌剤感受性

项目摘要

申請者を含む研究チームが既に作成したp53ミスセンス変異ライブラリー(KatoS,OtsukaKら、PNAS100,8424-8429,2003)には、1塩基置換により生じうる全ての1アミノ酸置換型変異p53(2314種類)が網羅されている。今回、申請者はこのライブラリーを用いてTP53cDNA上にミスセンス変異を持つp53発現プラスミドを約1000種類抽出した。このプラスミドのTP53cDNAのコドン72はプロリン(P)である。このプラスミドからTP53cDNA断片をPCR法により増幅し、コドン72がアルギニン(R)であるp53発現ベクターとともに出芽酵母内に導入し、相同組換え法によりコドン72がRに置換された変異p53発現ベクターを構築した。また酵母内にはWAF1遺伝子由来のp53結合配列を持つEGFPレポータープラスミドも導入されており、その発現を測定することにより転写活性化能を定量的に評価できるシステムとなっている。960種類の変異p53発現ベクターの構築を試みたが、実際に作成できたものは886種類(=92.3%)であった。コドン72がRである変異p53とPである変異p53とでその転写活性化能を定量的に比較した。結果、886変異体のうち、コドン72がRである場合とPである場合に、転写活性化能の有意差(p<0.001)を認めた変異体は10種類あった。その他の大多数のp53ミスセンス変異体においてはその転写活性化能はコドン72の遺伝子多型に大きな影響を受けなかった。今回得られた結果は、TP53にある変異が生じた場合にのみ、p53の転写活性化能が遺伝子多型により影響を受けることを実験的に示しており、コドン72遺伝子多型についての重要な知見である。今後。プラスミド構築時のPCRエラーの頻度を解析し、更に精度の高いデータに仕上げて発表する予定である。

The applicant included a study group consisting of p53 (2314 species), which was created by the author of the study group (KatoS, Otsuka K, PNAS100,8424- 8429, 2003) and a study group consisting of p53(2314 species), which was created by the author of the study group. In this case, the applicant has extracted about 1000 species from the TP53 cDNA.このプラスミドのTP53cDNAのコドン72はプロリン(P)である。The TP53 cDNA fragment was amplified by PCR, and p53 was detected by p72 and p73 (R). The p53 binding sequence of the WAF1 gene in yeast was evaluated quantitatively by introducing EGFP into the yeast and determining its expression. 960 kinds of different p53 appear in the construction of the test, in fact, the creation of the test 886 kinds (=92.3%) A quantitative comparison of the activation energy of the p53 and p53 is made. The results showed that 886 different species, 72 different species and 10 different species were identified. Most of the other p53 gene variants are affected by the gene polymorphism. The results obtained this time show that the writing activation of p53 can be affected by the genetic polymorphism in situations where TP53 can change, and the important insights into the genetic polymorphism of UDEN72 can be seen. In the future. The frequency of PCR amplification at the time of amplification is analyzed to improve the accuracy of the amplification.