感染性C型肝炎ウィルス粒子の精製と性状の解析

传染性丙型肝炎病毒颗粒的纯化及性质分析

• 批准号: 18790485
• 负责人: 森川 賢一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Showa University (2007)National Institute of Infectious Diseases (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790485/
• 关键词: HCV; ウイルス; 粒子; 精製

本研究は培養細胞で作製した感染性HCV粒子の精製法の確立、HCV粒子の性状解析を行い、ワクチン開発へ応用する事が目的である。培養上清から精製したウイルス粒子を用い、電子顕微鏡・SDS-PAGE・Western-blotting法・蛋白質量解析・脂質解析を行い、ウイルス粒子の性状を物理学的、生化学的に解析した。感染性HCV粒子を含んだ培養上清より約2000〜9000倍の精製度を有したウイルス粒子の精製標本を用いて性状解析した結果、HCV粒子は粒子単独ではなく、培養液中の添加物や培養細胞より分泌される蛋白質や脂質等の様々な物質と共在している事が示された。精製したウイルス粒子はキメラマウスに感染性を有し、持続感染を確認した。精製ウイルス粒子をUVにて不活化後、adjuvantと懸濁し、6週齢の雌のBALB/cマウスに免疫した。その後定期的に、免疫を繰り返すとともにマウス血清を採取した。マウス血清中のリコンビナントHCV-E2およびE1蛋白質に対する抗体価をELISA法にて測定した。さらに感染中和活性を測定するためにHCV粒子の感染阻止実験を行った。精製ウイルス粒子を免疫したマウスでは、HCVのE2およびE1に対するELISA法にて抗体価の上昇を確認した。同血清を用いたHuh7細胞へのHCV粒子の感染阻止実験では、濃度依存性に感染阻害がみられた。培養細胞上清中に分泌されるウイルス粒子より夾雑物を除去し精製度を高め、ウイルス粒子の性状を検討した。現在は、精製ウイルスを実験動物に免疫して、細胞性免疫反応や中和抗体の誘導などを検討中である。本研究はワクチン開発へつながる事が期待できる。

The purpose of this study is to establish a method for purification of infectious HCV particles, analyze the characteristics of HCV particles, and develop new methods for HCV infection. Culture supernatant purification, electron microscopy, SDS-PAGE, Western-blotting, protein analysis, lipid analysis, physical and biochemical analysis of particle properties The infectious HCV particles contained about 2000 ~ 9000 times the sperm concentration in the culture supernatant. The results showed that the HCV particles were isolated from the culture supernatant, and the additives in the culture medium and the proteins and lipids secreted by the cultured cells were present in the culture medium. Refined particles are infectious and persistent. Purified by UV irradiation, adjuvant suspension, 6 weeks old and female BALB/C immunity A regular diet. ELISA for detection of HCV-E2 and E1 proteins The infection neutralization activity of HCV particles was determined. E2 and E1 antibody levels were determined by ELISA. HCV particles infection in HUH7 cells was prevented by the use of the same serum, but the infection inhibition was concentration-dependent. Culture cell supernatant secretion of the protein, protein Now, we're going to refine the immune response of animals, cellular immune response, and induction of neutralizing antibodies. This study is aimed at the development and expectation of the future.

项目成果

The important regions for RNA replication and infectious virusparticle formation of JFH-1

JFH-1 RNA复制和感染性病毒颗粒形成的重要区域

• 发表时间: 2007
• 作者: Murayama A;他
• 通讯作者: 他

Characterization of infectious HCV particles produced from various liver-derived cell lines

各种肝源性细胞系产生的感染性 HCV 颗粒的表征

• 发表时间: 2007
• 作者: Akazawa D;他
• 通讯作者: 他

C型肝炎ウイルス脂質成分の感染における役割

丙型肝炎病毒脂质成分在感染中的作用

• 发表时间: 2007
• 作者: 相崎 英樹、鈴木 哲朗;他
• 通讯作者: 他

レジデントノート

居民笔记

• 发表时间: 2007
• 作者: K Morikawa;T Wakita. Infectious hepatitis C virus particle binding to the Huh7 cell surface is mediated by glycosaminoglycans;its internalization by CD81.;森川賢一
• 通讯作者: 森川賢一

Cell culture and infection system for hepatitis C virus

• DOI: 10.1038/nprot.2006.395
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: NATURE PROTOCOLS
• 影响因子: 14.8
• 作者: Kato, Takanobu;Date, Tomoko;Wakita, Takaji
• 通讯作者: Wakita, Takaji