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コネキシン43細胞内ループペプタイドによるギャップジャンクション標的治療法の研究

连接蛋白43胞内环肽间隙连接靶向治疗的研究

基本信息

批准号：
18790515
负责人：
関明子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究では、コネキシン(Cx)43分子の細胞内ループの後半部分(以下L2と称する)の構造決定に重要と思われる、2つのヒスチジン残基H126,H142のうち、H142について、これを別のアミノ酸(グルタミン酸)に置換した突然変異体H142Eを作成し、チャネルの電気生理学的性質(パッチクランプ法)及び構造(MRI)についての検討を行った。今年度の研究では、H126をアラニンに置換したH126Aについてチャネルの電気生理学的性質の検討を行った。パッチクランプ法によるシングルチャネル解析では、チャネルのunitary conductanceは74.6±2.9pS、96.2±0.8pSに2峰性のピークを認め、野生型と同様であったが、residual stateへの移行率は4.0%と、コントロール(61.2±1.2%)に比較して著明に低かった。チャネルの開口時間25.1±1.2msecは野生型(440-560ms)に比べて著明に短かった。また、H126Aの細胞内ループの後半部分(L2)と同じアミノ酸配列を持つ合成ペプタイド、H126A peptideをパッチ電極を介してCx43を発現しているN2A細胞内に導入し、シングルチャネル解析を行ったところ、unitary conductanceは90.8±0.5pSに単独のピークを認め、H126A peptide存在下では、L2peptide存在下と同様に、L2とCTの結合が障害されていることが示唆された。以上より、H126はH142同様、Cx43チャネルの機能に重要であると考えられた。今年度のもう一つの研究課題として、合成L2ペプタイドの生体への投与法の検討を行う予定であったが、9月に出産、育児のため、残念ながら十分な検討を行うには至らなかった。今後もこのテーマについては、研究を続けていく予定である。

The second half of the intracellular protein of Cx 43 molecule was studied in the past year. The structure determination of (hereinafter L2) is important for the study of structure (MRI), structure (H2), and structure (H2). This year's study is aimed at investigating the electrophysiological properties of H126 and H126A. The unitaryconductivity of the cluster was 74.6±2.9pS, 96.2±0.8pS, and the transition rate of the residual state was 4.0% and 61.2±1.2% respectively. The opening time of the ring was 25.1± 1.2 msec, which was shorter than that of the wild type (440-560ms). The second half of H126A's intracellular protein (L2) was identified by the same acid alignment as H126A peptide in the presence of Cx43, and the unitary-conductivity was 90.8±0.5pS in the presence of L2peptide. L2 and CT are combined to form a barrier. The above, H126 and H142 are the same, Cx43 and Cx43 are important functions. This year's research topic is to synthesize L2, to produce, to breed and to study biological methods. In the future, we will study and discuss the future.