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脱ヨード酵素遺伝子転写調節機構を利用した選択的甲状腺ホルモン作用調節因子の探索

利用脱碘酶基因转录调控机制寻找选择性甲状腺激素作用调节因子

基本信息

批准号：
18790635
负责人：
金本巨哲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790635/
关键词：
遺伝子甲状腺ホルモン脂質代謝

项目摘要

ヒト末梢白血球よりゲノムを抽出し,PCR法を用いてヒト脱ヨード酵素1型(D1)遺伝子5'上流域(2kbp)をクローニングした。これを鋳型としてPCR法により種々の長さの欠失を有するヒトD1遺伝子5'上流域をルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子とするプラスミドに組み込んでコンストラクトを作成した。これらのコンストラクトをヒト肝臓由来細胞株へ一過性に導入しレポーター活性を測定したところ,翻訳開始点より-225〜177bpの間で活性が変化した。一方,ヒト腎臓由来細胞株および子宮頚癌由来細胞株では上記領域での活性変化はほとんど認めたなかったことから,これらの領域は肝臓特異的にヒトD1遺伝子プロモーター活性が変化する領域であると考えられた。コンピューター検索により上記領域には肝臓特異的な転写因子であるC/EBPの結合領域が存在したため,当該部位に変異を導入したコンストラクトを作製し同様にレポーター活性を測定したところ,変異を導入していない(野生型)コンストラクトと比較して活性が変化した。この結果に基づきc/EBPαのsiRNAを作製し肝臓由来細胞株へ一過性に導入しヒトD1遺伝子発現の変化を定量PCR法で検討を行ったが,ヒトD1遺伝子発現に変化を認めなかった。また,当該結合領域をプローブとし肝臓由来細胞株から抽出した核タンパクを用いて行ったゲルシフトアッセイにても当該領域への核タンパクの結合は認められなかった。以上の結果より,上記の領域へのC/EBPαの直接的結合は認められず,C/EBPαがヒトD1遺伝子の転写調節に関与している可能性は低いと考えられ,同領域にC/EBPの他のアイソフォームもしくは他の(転写)因子が結合することによりヒトD1遺伝子の転写調節に関与している可能性が考えられた。

In addition, the DNA of peripheral leukocytes was extracted by PCR, and the DNA of type 1 (D1) gene was extracted by PCR. The PCR method is used to detect the long and short distance between the two species. The activity of the transplants was measured at-225 to 177 bp. The cell lines derived from kidney cancer and uterine cancer are characterized by activity in the domain of D1 gene and activity in the domain of D1 gene. The binding domain of C/EBP was determined when C/EBP was introduced. The results showed that siRNA targeting p53/EBPα were transiently introduced into liver derived cell lines, and the expression of p53/EBP α was detected by quantitative PCR. When the binding domain is removed from the liver-derived cell line, the binding domain is removed from the cell line and the binding domain is removed from the cell line. As a result, the direct combination of C/EBPα in the domain mentioned above is relatively low in probability, and the direct combination of C/EBPα and D1 gene is relatively low in probability.