急性骨髄性白血病抗原に対する網羅的探索と新規抗体療法開発のための基礎的研究

急性髓系白血病抗原综合寻找及新型抗体疗法开发的基础研究

• 批准号: 18790665
• 负责人: 山本 幸也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790665/
• 关键词: 急性骨髄性白血病; 抗体療法; ファージライブラリー

A:急性骨髄性白血病(AML)抗原スクリーニング:AML(M4)初診患者検体をサンプルにしてファージライブラリーからスクリーニングを行った。190クローンをピックアップし、153個の遺伝子配列を調べた。78個の独立したクローンが得られた。その内32クローンの塩基配列は3種類からなるALCAM/CD166に対する抗体、5クローンがであった MCP/CD46であった。癌腫別細胞株を用いた組織特異性の検討から10種類が汎細胞株特異的、10種類が血液細胞特異的、13種類がAML細胞株特異的に結合することをELISA、FACSで確認した。結合力の高い抗体について抗原を調べるために順次、免疫沈降法により抗原の精製、ペプチドシークエンスによる蛋白同定を行った。83-176,73-16は CD93(ClqRp/AA4)が抗原であることをCD93強制発現系にて確認した。CD93は骨髄球、単球、血管内皮、造血幹細胞で発現していることが知られているが、このCD93scFv抗体でも末梢血の顆粒球、単球が陽性になることを確認した。また精製したCD93scFv抗体はmonomerであるが単球系AML細胞株を分化は起こさないものの細胞を凝集させ、軽度ではあるが増殖を抑えたがアポトーシスの誘導は見られなかった。AML患者検体での発現をFACS解析で検討したところMO(0/2),M1(0/4),M2(5/13),M3(2/5),M4(4/6),M5(1/1)で陽性であり分化した病型に多いことが確認された。B:受容体型チロシンキナーゼFLT3抗体作製:293T細胞で高発現するベクターを用いてAIMSライブラリーから FLT3発現細胞を使いスクリーニングを行っている。現在、2種類の抗体クローンを単離した。更に多くのクローンの種類を取得するとともに抗体によるFLT3リガンド刺激の中和活性検討する。

A: Acute Osteopathic Leukemia (AML) Antigen List:AML(M4) Newly Diagnosed Patients List: AML 190 entries, 153 entries, and a list of entries. 78 of them are independent. The base pairs of the 32 molecules in the system are 3 types: ALCAM/CD166, MCP/CD46. Tissue-specific assays for cancer cell lines included 10 cell line-specific assays, 10 blood cell-specific assays, and 13 AML cell-specific assays, which were confirmed by ELISA and FACS. Antigen purification, protein identification by immunoprecipitation method 83- 176, 73 -16, CD93 (ClqRp/AA4), CD93 stress system CD93 was detected in bone marrow, lymphocytes, vascular endothelium and hematopoietic stem cells, and CD93 scFv antibody was detected in peripheral blood granulocytes and lymphocytes. CD93 scFv antibody was purified from AML cell lines and induced to agglutinate and proliferate. FACS analysis of AML patients revealed that MO(0/2),M1(0/4),M2(5/13),M3(2/5),M4(4/6),M5(1/1) were positive for AML, and the differentiation of AML was confirmed. B: Receptor-type FLT3 antibody production:293T cells are highly expressed in AIMS cells. Now, two kinds of antibody are isolated. In addition, a variety of species were obtained, and FLT3 was stimulated and neutralized by antibodies.