強皮症のHGF遺伝子プラスミドを用いた遺伝子療法の臨床的応用

HGF基因质粒基因治疗硬皮病的临床应用

• 批准号: 18790777
• 负责人: 呉 明花
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790777/
• 关键词: 強皮症; モデルマウス; HGF; TGF-b; ケモカイン; サイトカイン; 遺伝子療法; プラスミド

(1)HGF遺伝子プラスミド投与による皮膚硬化抑制の解析ブレオマイシン(BLM)をC3Hマウスに4週間、連日皮下注射し硬化を誘導。その後、ヒトHGF cDNA(2.2Kb)をvector plasmidに挿入後、HJV-liposomeに組み込み10mcg/mouse筋肉内に2週間ごとに2回投与しPBSを筋肉内に投与した群と4週間後に比較検討した。BLM最終投与4週間後に、背部皮膚を切除し組織学的に検討した。一部の実験ではホルマリン固定した組織標本において、H＆E染色以外にトルイジンプルー、ギムザ、コンゴレッド染色を各々施行し、硬化病変部における皮膚の厚さと結合織の変化を検討したとことHGFプラスミド投与群では減少していた。また、皮膚ハイドロキシプロリン量をWoessnerの方法を用いて測定したところHGFプラスミド投与群で明らかにハイドロオキシプロリン量が減少していた。さらに、human HGFがmRNA、蛋白レベルで発現しているかを明らかにするため皮膚、肺、筋肉、腎臓などの臓器の抽出液および血清よりRT-PCR法、ELISA法を用いて測定したところ産生が確認できた。HGFの発現分布を検討するため、抗ヒトHGF抗体を用いて免疫組織化学的に検討した。さらに、皮膚におけるTGF一β1の発現レベルを測定するためELISA, RT-PCR法を用いてmRNA,蛋白レベルで定量した。(2)HGF遺伝子によるサイトカインの動態の検討HGF遺伝子プラスミドあるいはコントロールプラスミドを投与した強皮症マウスの皮膚をそれぞれ採取し、発現されているサイトカイン(TGF-β,PDGF, CTGF, IL-6,IL-4,IL-5,bNGFなど)をRT-PCR法と免疫組織法を用いて検討したところHGFプラスミド投与群でTGF-βの発現が減少していた。HGF投与してそれぞれに皮膚におけるサイトカイン発現を検討し、主要な役割をはたすサイトカインがTGF-βであることを明らかにした。また、同時に、それらの操作によって出現する局所浸潤細胞を検討し、主役を務める炎症細胞が肥満細胞であることが明らかになった。

（1）通过在C3H小鼠中皮下注射HGF基因质粒博来霉素（BLM）对抑制皮肤硬化症的抑制作用4周，以诱导僵硬。之后，将人HGF cDNA（2.2KB）插入载体质粒中，然后每2周两次在HJV-脂质体中施用，直至10mcg/小鼠肌肉内，然后与组给予的PBS PBS肌肉内四个星期进行比较。最终给药后四个星期，去除背皮并在组织学检查中检查。 In some experiments, in addition to H&E staining, toluidinprug, Giemsa, and Congo red staining were performed in tissue specimens fixed to formalin, and in addition to H&E staining, changes in skin thickness and binding weave in the sclerosed lesions were examined, which resulted in a decrease in the HGF plasmid-administered group.此外，当使用Woessner的方法测量羟基丙烯酸酯的量时，在给予HGF质粒的组中明显减少了羟基丙烯的量。此外，为了澄清人类HGF是否在mRNA和蛋白质水平上表达，通过使用RT-PCR和ELISA方法测量器官，肺，肺，肌肉和肾脏等器官的提取物和血清来确认产生。为了研究HGF表达的分布，使用抗人HGF抗体进行了免疫组织化学研究。此外，为了测量皮肤中TGF1β1的表达水平，使用ELISA和RT-PCR在mRNA和蛋白质水平上进行定量。 （2）通过HGF基因检查细胞因子动力学的皮肤小鼠的皮肤HGF基因质粒或对照质粒被施用，并表达的细胞因子（TGF-β，PDGF，CTGF，CTGF，CTGF，IL-6，IL-6，IL-4，IL-4，IL-5，BNGF等）被研究HGF质粒组降低了TGF-β的表达。通过施用HGF检查了皮肤中的细胞因子表达，并且发现起主要作用的细胞因子是TGF-β。同时，检查了通过这些过程出现的局部浸润细胞，并发现起主要作用的炎​​症细胞是肥大细胞。

项目成果

Nakedhepatocyte growth factor (HGF) plasmid DNA prevents the symptoms of the dermal sclerosis in a mouse model of scleroderma

裸肝细胞生长因子 (HGF) 质粒 DNA 可预防硬皮病小鼠模型中的真皮硬化症状

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Invest Dermatol 126(4)
• 作者: Yamaguchi Y;TsuKimori K;Hojo S et al.;北條哲史;北條 哲史;金城唯宗;Wu MH et al.
• 通讯作者: Wu MH et al.