ヒト肝細胞キメラマウスを用いた化学発癌誘発

使用人肝细胞嵌合小鼠进行化学致癌诱导

• 批准号: 18790958
• 负责人: 福本 和彦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790958/
• 关键词: 肝細胞; キメラ; 化学発癌; トランスジェニックマウス; 移植

レシピエントマウスの作成のため、Alb-uPA/scidマウスを系統維持している。Alb-uPAホモマウスをPCRにて同定し、移植のレシピエントマウスとして使用した。現在、常に6家系からAlb-uPAホモマウスを産出できる環境になった。肝細胞移植手術の条件決めを行うために、生体蛍光蛋白(GFPを肝細胞に、あるいはDsRed2を全身の細胞に)を発現するトランスジェニックマウスより肝細胞をコラゲナーゼ還流法にて採取した。この生体蛍光蛋白を標識として生後14日目のA1b-uPAホモscidマウスの脾臓に移植した。一定期間の後、移植されたマウスを屠殺し肝凍結切片を作成した。蛍光顕微鏡にて移植されたコロニーが蛍光を発することを確認した。また抗GFP抗体による免疫染色でもコロニーが濃染され肝細胞移植手術が成功していることが確認できた。ヒト肝細胞でも同様の手技で移植手術を行い、ヒト肝細胞キメラマウスを作成した。化学発癌実験については、Diethylnitrosamin(DEN)の腹腔内投与とphenobarbital(PB)の飲水投与プロトコールをscidマウスに行い、適正投与量を検討した。DEN10mg/Kg、PB500mg/Lで35週以上の生存が可能であったが、発癌は認めなかった。肝細胞移植マウスに投与して発癌を観察しているが、現時点では発癌は確認できていない。

Alb-uPA/scid system maintenance Alb-uPA is used for PCR amplification. Now, the six families are often called Alb-uPA. Liver cell transplantation conditions are determined by the use of biological photoproteins (GFP, DsRed2, whole body cells). The biological protein was identified by A1b-uPA on the 14th day after birth. After a certain period of time, the liver was frozen. The optical microscope was used to determine the position of the laser beam. Anti-GFP antibodies were detected by immunostaining, and the results of liver cell transplantation were confirmed. Liver cell transplantation is performed in the same way as liver cell transplantation. Chemical carcinogenesis, intraperitoneal administration of diethylnitrosamine (DEN) and phenobarbital(PB) in drinking water and scid treatment were investigated. DEN10mg/Kg, PB500mg/L 35 weeks survival Liver cell transplantation is the first time that cancer has been detected.

项目成果

Efficient Isolation Technique of Hepatocytes from the Liver of GFP-and DsRed2-transgenic Mice

从 GFP 和 DsRed2 转基因小鼠肝脏中高效分离肝细胞的技术

• 发表时间: 2007
• 作者: M. Ikeda;M. Makuuchi;K. Hasegawa;T. Ishizawa;T. Aoki;K. Sano;H. Imamura;Y. Sugawara;N. Kokudo.;Kazuhiko Fukumoto
• 通讯作者: Kazuhiko Fukumoto