リガンド非依存性エストロジェン受容体活性化の生理的意義に関する研究

非配体依赖性雌激素受体激活的生理意义研究

• 批准号: 18791148
• 负责人: 石田 真帆
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791148/
• 关键词: エストロジェン; ERE; エストロジェン受容体; プロラクチン; アデノウイルスベクター; ドーパミン; ブロモクリプチン; GH4ZR7; ER; ルシフェラーゼ; 下垂体前葉; Cre; loxP

ERE配列に接続したルシフェラーゼ遺伝子をアデノウイルスベクターを用いて遺伝子導入し,その発現を指標としたエストロジェンの転写活性化能が,プロラクチン細胞においてドーパミンD2受容体刺激特異的に抑制されることを確認し,そのメカニズムを検討した。パーコール密度勾配遠心分離法により得られた75%濃縮プロラクチン細胞集団において,ブロモクリプチンによりルシフェラーゼ遺伝子発現が抑制されることを確認した。またこのルシフェラーゼ遺伝子発現が,エストロジェン受容体アンタゴニストであるICI182,780投与により用量依存性に抑制された。このエストロジェンの転写活性化能は,ブロモクリプチンの内因性アゴニストであるドーパミンによっても抑制された。このブロモクリプチンの抑制作用は,ドーパミンD2受容体アンタゴニストの投与により用量依存的に回復し,ドーパミンD1受容体アゴニストを投与した場合にはブロモクリプチンの作用は再現されなかった。またこのようなエストロジェンの転写活性化能に対するドーパミンの抑制作用は,細胞株GH4ZR7では認められなかった。1,ウエスタンブロッティング法及び,Quantitative RT-PCR法により,ブロモクリプチン投与におけるエストロジェン受容体αの発現量の減少が認められなかったことから,ドーパミン刺激によるエストロジェンの転写活性化能抑制作用は,エストロジェン受容体αの発現量減少に基づくものではないことが確認された。2,フォルスコリンの投与により,ブロモクリプチンによる抑制作用は部分的に回復したが,完全には回復しなかった。またブロモクリプチンの抑制作用はPKAインヒビターの投与により再現されることは確認できず,ドーパミンの作用がcAMP抑制を介した経路をとる可能性は低いと考えられた。

使用腺病毒载体转移了连接到ERE序列的荧光素酶基因，并证实雌激素使用其表达作为指示剂的转录激活能力在催乳素细胞中的多巴胺D2受体刺激中特异性抑制，并研究了该机制机制的机制。据证实，溴ir带抑制了通过percol密度梯度离心获得的75％富集催乳素细胞群体中荧光素酶基因的表达。此外，该荧光素酶基因表达被剂量依赖性地抑制了ICI182,780（雌激素受体拮抗剂）。多巴胺的内源性激动剂的多巴胺也抑制了这种雌激素的转录激活能力。通过给予多巴胺D2受体拮抗剂，以剂量依赖性的方式恢复了溴o不般的这种抑制作用，当多巴胺D1受体激动剂施用时，溴o不般的作用不会再现。此外，在细胞系GH4ZR7中观察到多巴胺对雌激素转录激活能力的抑制作用。 1。蛋白质印迹和定量RT-PCR方法显示，溴ocr氨基氨基氨基氨基氨基氨基氨基氨基胺在给药时雌激素受体α的表达水平没有降低，并且已经证实，通过多巴胺刺激的雌激素转录激活能力的抑制作用不是基于雌激素受体α表达水平的降低。 2。施用福斯科蛋白的给药部分恢复了溴o不般的抑制作用，但尚未完全恢复。此外，尚未证实溴o不般的抑制作用是通过给药PKA抑制剂再现的，并且人们认为多巴胺的作用会通过cAMP抑制而采取途径。

项目成果

プロラクチン細胞においてドーパミンはエストロジェン受容体活性を抑制する

多巴胺抑制催乳素细胞中雌激素受体的活性

• 发表时间: 2008
• 作者: Maho Ishida;Jun Arita;石田 真帆
• 通讯作者: 石田 真帆

Dopamine inhibition of estrogen receptor activity in pituitary Iactotrophs

多巴胺抑制垂体催乳素雌激素受体活性

• 发表时间: 2008
• 期刊: The Journal of Physiological Scineces Vol.58 Suppl.
• 作者: Kousuke Yoshinaga;et al;Kousuke Yoshinaga;Kousuke Yoshinaga;Kousuke Yoshinaga. Vasohibin;Kousuke Yoshinaga;Maho Ishida
• 通讯作者: Maho Ishida

Adenovirus-mediated conditional luciferase reporter assay system for detection of the transcriptional activation of estrogen response element (ERE) in pituitary lactotroph cells

腺病毒介导的条件荧光素酶报告基因测定系统，用于检测垂体催乳素细胞中雌激素反应元件（ERE）的转录激活

• 发表时间: 2006
• 期刊: The Journal of Physiological Sciences Vol. 56・suppl.
• 作者: Maho Ishida;Jun Arita
• 通讯作者: Jun Arita