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マイクロバブルと超音波を用いた遺伝子導入法に関する基礎的研究

利用微泡和超声波的基因转移方法的基础研究

基本信息

批准号：
07J02719
负责人：
岡田健吾
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,臨床応用可能な超音波による遺伝子導入の実現を最終目標としており,前年度は,遺伝子発現率が他の手法に比べて低い原因について検討し,核膜の有無が発現効率に及ぼす影響は小さいことを示した.そこで本年度は,細胞内に導入される遺伝子の量に着目し,導入効率の向上に関する検討を行った.さらに,本手法において重要なもう一つの現象である損傷細胞膜の修復メカニズムに関する検討も行った.○遺伝子を付着させることが可能な微小気泡の作製遺伝子の導入効率を向上させるためには,その導入口である膜損傷部位近傍での遺伝子密度を増加させれば良く,そのためには膜損傷を生じさせる微小気泡に遺伝子を付着させれば良い.・まず,微小気泡に遺伝子を付着させる手法を新たに開発した.作製した気泡に遺伝子が付着していることを核酸標識色素propidium iodideを用いて確認した.・作製した気泡を用いて遺伝子の発現率を評価した.遺伝子を培養液に均質に懸濁させた状態では損傷細胞の約1%程度にしか発現がみられなかったが,気泡に遺伝子を付着させた場合には約56%に発現がみられ,本手法の効率を大幅に向上できることを確認した.○細胞膜修復機序の解明遺伝子導入においてもう一つの重要な要素である損傷した細胞膜の修復機序を,タイムラプス観察を通じて検討した.膜修復が10秒以内に完了する場合と,数十秒以上必要とする場合では,それぞれ,脂質膜の受動的な修復およびエキソサイトーシスによる細胞の能動的な修復機構によるものでることを示した.○博士論文の作成これまでに得られた成果をまとめて博士論文を作成した.

In this study, it is possible to use ultrasound to get the most accurate results. In the previous year, the rate of other methods was lower than that of the previous year. The nuclear membrane showed that there was an increase in the rate of the disease and that in the nuclear membrane. In the current year, the number of people in the cell has been measured, and the rate of entry has increased. In this technique, it is important to know that the cell membrane is repaired, the membrane is repaired, the cell membrane is repaired, the cell membrane is repaired, and the cell You know, you know, the membrane, the membrane There is a lot of money, and a small amount of money is needed to start a new business. Make sure that the nucleic acid marker propidium iodide is used to confirm the nucleic acid labeling. In order to make a good job, you can use the rate to make a mistake. The average value of the solution is about 1%. You can see that you have a lot of trouble, and you have to pay for about 56% of the time. This technique greatly increases the frequency of the cell membrane repair machine to confirm that the cell membrane repair machine is used to verify that the cell membrane repair machine is very important in the cell membrane repair machine. After the repair of the membrane has been completed within 10 seconds, it is necessary to complete the repair of the membrane in more than tens of seconds. the repair of the lipid membrane has been performed by the machine that can perform the operation. Dr. 0 has completed the paper and the result has been completed by the doctor.