クラススイッチ組み換えとB細胞分化の分子機構に関する研究

类别转换重组与B细胞分化的分子机制研究

• 批准号: 07J02689
• 负责人: 塚本 裕美子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02689/
• 关键词: 自然免疫; TLR7; 適応免疫; 分子生物学; クラススイッチ組み換え

前年度までの研究から、マウスから精製した脾臓B細胞に抗CD38抗体、IL-4およ、びグアノシンの置換体である8-メルカプトグアノシン(8-SGuo)による刺激を加えることによってIgG1クラスへのクラススイッチ組み換え(CSR)が誘導される系を確立した。また、8-SGuoは病源体由来の核酸(RNA)を認識するTLR7のリガンドとして機能していることも明らかにした。がらに、既知のTLR7リガンドとして知られているloxを用いても8-SGuoと同様にCSRを誘導することを見出した。しかしloxは樹状細胞、マクロファージの活性化の様相が8-SGuoとは異なったことから、細胞間でTLR7リガンド認識機構に関する違いがあることが示唆された。そこでTLR7のリガンド認識機構について解析を行った。TLR9は細胞内で切断されてリガンドを認識できるフォームへと変換されることが見出されたためTLR7においても同様の機構でリガンドを認識しているのかどうか。その結果、TLR7でもLRRドメインの切断が誘導されていることが明らかになった。現在切断部位を特定し、LRRドメインの切断がリガンド認識に与える影響について解析を行っている。TLR7の切断部位を変異させたフォームを細胞株に発現させ、リガンドに対する反応性を検討している。TLR7、TLR9のリガンド認識メカニズムが相異なることで、リガンドを与えた場合の反応性が異なる理由を解明する一助となると考えられる。また、TLR7のLRRドメイン切断に対する反応性の相違によって8-SGuo、loxの反応性の相違が説明できるのではないかと仮説を立てている。本年はDC2採用二年目にあたり、これまでの研究成果の纏めも重要な仕事となった。B細胞のクラススイッチ組み換えに関する研究成果については、Molecular Immunology誌から論文が出版されている。

从研究到上一年，我们建立了一个系统，在该系统中，使用抗CD38抗体，IL-4和鸟嘌呤取代8-甲基to虫（8-SGUO）刺激类别的类开关重组（CSR）到IgG1类，从而诱导了从小鼠那里纯化的splenic b细胞。还揭示了8-SGUO充当TLR7的配体，该配体识别源自病原体的核酸（RNA）。此外，我们发现LOX（称为已知的TLR7配体）也以与8-SGUO相同的方式诱导CSR。然而，LOX与树突状细胞和巨噬细胞的激活方面的8-SGUO不同，这表明细胞之间的TLR7配体识别机制存在差异。因此，我们分析了TLR7配体识别的机制。发现TLR9在细胞中切割并转化为可以识别配体的形式，因此是否可以使用类似的机制在TLR7中识别配体？结果，发现TLR7还诱导了LRR结构域的裂解。当前，鉴定了裂解位点，并分析了LRR结构域对配体识别的裂解的影响。具有突变的TLR7切割位点的形式在细胞系中表达，并研究了其对配体的反应性。 TLR7和TLR9的不同配体识别机制可能有助于阐明为什么给定配体时的反应性不同。我们还假设对TLR7 LRR结构域的反应性差异可以解释8-SGUO和LOX的反应性差异。今年是DC2采用的第二年，到目前为止我的研究结果也已成为一项重要任务。关于B细胞类转换重组的研究结果的分子免疫学杂志已发表了一篇论文。

项目成果

Toll-like receptor 7 cooperates with IL-4 in activated B cells through antigen receptor or CD38 and induces class switch recombination and IgG1 production

• DOI: 10.1016/j.molimm.2008.11.022
• 发表时间: 2009-04-01
• 期刊: MOLECULAR IMMUNOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Tsukamoto, Yumiko;Nagai, Yoshinori;Takatsua, Kiyoshi
• 通讯作者: Takatsua, Kiyoshi

TLR7 signaling in B cells cooperates with CD38 and BCR signaling for inducton of class switch recombination

B 细胞中的 TLR7 信号传导与 CD38 和 BCR 信号传导协同作用，诱导类别转换重组

• 发表时间: 2007
• 作者: 野崎達生;加藤泰浩;鈴木勝彦;野崎 達生・中村 謙太郎・淡路 俊作・加藤 泰浩;野崎 達生・加藤 泰浩・鈴木 勝彦;藤永 公一郎・中村 仁美・野崎 達生・淡路 俊作・森口 恵美・加藤 泰浩;Михоко Като;Mihoko Kato;Mihoko Kato;加藤美保子;Михоко Като;Yumiko Tsukamoto;塚本 裕美子
• 通讯作者: 塚本 裕美子