核外輸送因子exportin-5によるmicroRNA品質管理構造的基盤

核输出因子exportin-5控制microRNA质量的结构基础

• 批准号: 07J02896
• 负责人: 佐々木 浩
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02896/
• 关键词: 構造生物学; microRNA; 核細胞質間輸送; 核外輸送因子

これまでの研究により,大腸菌組み換えタンパク質として発現させたヒトexportin-5は凝集体を形成しやすいこと,また当研究室で作製したシャペロン・マイナーtRNA共発現系を利用することで発現・可溶化を改善できることが分かっていた.しかし,依然として可溶化率が低く,結晶化に十分な量のタンパク質を調製することができないという問題があったため,この問題の解決に取り組んだ.培養条件・精製条件を詳細に検討したところ,可溶化率が向上する条件を発見することができた.また,当研究室で開発された大腸菌由来無細胞生物発現系によるヒトexportin-5の発現を試みた.通常の大腸菌由来無細胞生物発現系では真核生物由来タンパク質の発現は困難な場合が多い.これはシャペロン系が異なるというだけでなく,そもそも無細胞生物発現系内でmRNAの半減期が短く,十分な量の翻訳産物が産生されにくいことも原因である.大腸菌抽出液調製法を検討することで,mRNA分解活性を抑え,これまでと比べて翻訳産物の収量を大幅に改善した無細胞生物発現系の構築に成功した.現在,無細胞生物発現系を利用したexportin-5, Ran, pre-miRNAの複合体形成を試みている.

In this paper, we studied the effect of microorganism on the formation of exportin-5 condensate in the laboratory, which was used to improve the solubility of tRNA in the laboratory. The solubility is still very low, and the results show that the solubility is very high, and the solubility is very low. The conditions are fine, the conditions are fine, and the solubility is up and down. see the conditions. In recent years, when the laboratory has started to test the pathogenic bacteria, the biological strain exportin-5 has been tested. In general, the origin of the fungus, the cell biology, the eukaryote origin, the eukaryote origin, In the department of cellular biology, the half-life period of mRNA is very short, and the quantity is very high. The biodegradation activity of mRNA was inhibited by the method of fungus extract, which was much better than that of cell biology. the biodegradation activity of Fusarium oxysporum was significantly improved. At present, the cell biology system uses the complex of exportin-5, Ran and pre-miRNA to form the mother cell.

项目成果

大学院生による科学者コミュニケーションの可能性と課題:東大院生有志グループOto1の実践を通して

研究生科学家交流的可能性与挑战：通过东京大学研究生志愿者团体Oto1的实践

• 发表时间: 2009
• 期刊: Japanese Journal of Science Communication 6
• 作者: 小寺千絵;池内桃子;岩崎渉;榎戸輝揚;生出秀行;音野瑛俊;佐々木浩;砂田麻里子;手塚真樹;豊田丈典;永村直佳;浜地貴志;平沢達矢;松尾信一郎;宮武広直;横山広美
• 通讯作者: 横山広美

古細菌/真核生物型フェニルアラニルtRNA合成酵素の校正機構

古菌/真核苯丙氨酰-tRNA合成酶的校准机制

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐々木 浩;関根 俊一;横山 茂之
• 通讯作者: 横山 茂之