dGTPの酸化損傷体の生細胞における変異誘発とその防御機構の解明

氧化损伤活细胞中 dGTP 的诱变及其保护机制的阐明

• 批准号: 07J03120
• 负责人: 堀 美香
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J03120/
• 关键词: 酸化損傷ヌクレオチド; ヌクレオチドプール浄化酵素; 変異; 二次酸化体; 癌; 酸化ストレス; 8-hydroxyguanine; siRNA; ヌクレオチド除去修復

本研究では、酸化ストレスマーカーである8-hydroxyguanineのヌクレオチド体、8-hydroxy-dGTP(8-OH-dGTP)とその二次酸化体、spiroiminodihydantoin-2'-deoxynucleoside 5'-triphosphate(dSpTP)及びguanidinohydantoin-2'-deoxynucleoside 5'-triphosphate(dGhTP)の生細胞における変異誘発能とその除去にDNA修復機相が関与するか否かを明らかにすることを目的とする。1.dSpTP及びdGhTPの大腸菌における変異原性の評価とdSpTPやdGhTPを分解するヌクレオチドプール浄化酵素の探索:dSpTP及びdGhTPを大腸菌に直接導入し、変異体率を算出した。その結果、コントロールと比較して変異体率の上昇は観察されなかった。また、ヌクレオチドプール浄化酵素MTH1、MutT、Orf17蛋白質を精製し、dSpTPやdGhTPの分解活性を評価したが、分解活性は観察されなかった。2.哺乳動物細胞を用いたヌクレオチドプール浄化酵素の酸化損傷ヌクレオチド除去への関与:哺乳動物細胞のヌクレオチドプール浄化酵素MTH1、MTH2、NUDT5が8-OH-dGTPにより誘発される変異を抑制するか否か検討した。siRNAを用いて各蛋白質をノックダウンしたヒト293T細胞に8-OH-dGTPを直接導入し、誘発変異を調べた。その結果、MTH2及びNUDT5をノックダウンした細胞において、コントロールsiRNA導入時と比較し、8-OH-dGTP誘発変異が上昇し、さらに3種の蛋白質を同時にノックダウンすると、誘発変異が2倍に上昇した。このことから、MTH1、MTH2、NUDT5は、哺乳動物細胞において、互いに補完しあい、8-OH-dGTPにより誘発される変異を抑制していることが示唆された。

In this study, で で, acidification ストレス カ カ である8-hydroxyguanine <s:1> ヌ レ レ チド チド チド チド チド チド チド チド, 8-hydroxy-dGTP(8-OH-dGTP)とそ <s:1> secondary acidification, spiroiminodihydantoin-2'-deoxynucleoside were studied 5'-triphosphate(dSpTP) and びguanidinohydantoin-2'-deoxynucleoside 5 '- triphosphate (dGhTP) の raw cell に お け る - different 発 can lure と そ の remove に DNA repair machine phase が masato and す る か no か を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. 1. DSpTP and び dGhTP の coliform に お け る - different original sex の review 価 と dSpTP や dGhTP を decomposition す る ヌ ク レ オ チ ド プ ー ル incorporated phenoloxidase の exploration: dSpTP and び dGhTP を coliform に directly import し, 1 - rate を calculate し た. Youdaoplaceholder0 <s:1> results, コ トロ トロ そ と と と と comparison, <s:1> て variant rate <e:1> increase, 観 観 observe されな った った った. ま た, ヌ ク レ オ チ ド プ ー ル incorporated phenoloxidase MTH1, MutT, Orf17 protein を refined し, dSpTP や dGhTP の を decomposition activity evaluation 価 し た が, decomposition activity は 観 examine さ れ な か っ た. 2. Mammalian cells を with い た ヌ ク レ オ チ ド プ ー ル incorporated phenoloxidase の acidification damage ヌ ク レ オ チ ド remove へ の masato and: mammalian cells の ヌ ク レ オ チ ド プ ー ル incorporated phenoloxidase MTH1, MTH2, NUDT5 が 8 - OH - dGTP に よ り 発 lure さ れ る - different を inhibit す る か no か beg し 検 た. SiRNA を with い て each protein を ノ ッ ク ダ ウ ン し た ヒ ト 293 t cells に 8 - OH - dGTP を directly import し, induced 発 - different を adjustable べ た. そ の results, MTH2 and び NUDT5 を ノ ッ ク ダ ウ ン し た cells に お い て, コ ン ト ロ ー ル siRNA import と more し, 8 - OH - dGTP 発 lure - different rising が し, さ ら に three の protein を also に ノ ッ ク ダ ウ ン す る と, induced 発 rising twice - different が に し た. こ の こ と か ら, MTH1, MTH2, NUDT5 は, mammalian cells に お い て, mutual い に fill out し あ い, 8 - OH - dGTP に よ り 発 lure さ れ る - different を inhibit し て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

8-ヒドロキシグアニンが誘発する変異と損傷乗り越えDNAポリメラーゼ

8-羟基鸟嘌呤诱导的突变和损伤克服 DNA 聚合酶

• 发表时间: 2008
• 作者: 古田健也;豊島陽子;Fuminori Kobayashi;Fuminori Kobayashi;本村洋一;倉橋夢人;小林史典;小林史典;小林史典;小林史典;紙谷浩之
• 通讯作者: 紙谷浩之