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シェーグレン症候群発症における分子機構の解明

阐明干燥综合征发病的分子机制

基本信息

批准号：
07J04763
负责人：
若松英
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:シェーグレン症候群(SS)の唾液腺特異的自己抗原であるM3ムスカリン性アセチルコリン受容体(M3R)をターゲットとし、SSモデルマウスの作成、およびモデルマウスを用いてSSの発症、進行の機序を明らかにすることを目的とした。方法:1)M3R細胞外領域をコードする合成ペプチドのmix(それぞれ20ug)と完全フロイドアジュバント(CFA)でエマルジョンを作製し、M3R欠損マウス(M3R KO)に免疫をした。初回免疫10日後にM3R peptide mixを追加免疫した。追加免疫10日後の脾臓を単離し、M3R peptide mixを抗原として、脾細胞を72時間培養した。2)また、追加免疫10日後の脾細胞をRag1欠損マウス(Rag1 KO)に1x10^7細胞をi.vで移入した。移入45日後の唾液量、および血清中における抗M3R抗体の測定をおこなった。3)さらに、移入45日後の唾液腺、および涙腺を単離し、HE染色、および免疫組織化学染色法を用いて、組織学的検討を行った。結果:1)M3R peptide mix免疫C57BL/6マウスと比較して、M3R KO由来の脾細胞からIFNγ、IL17の高い産生が認められた。2)C57BL/6由来脾細胞を移入したRag1 KOマウスと比較して、M3R KO由来脾細胞を移入したRag1 KOマウスにおいて、唾液量の減少が認められた。また、同マウスにおいて、抗M3R抗体が検出された。3)移入45日後、M3R KO由来脾細胞を移入したRag1 KOマウスの唾液腺においてのみ細胞浸潤が認められた。涙腺においても軽度の浸潤が認められた。さらに、免疫組織学染色法の結果から、浸潤しているほとんどの細胞がCD4陽性T細胞であることが明らかとなった。一方でB細胞、およびCD8陽性細胞の浸潤はあまり認められなかった。考察:M3R KOマウスにM3R peptide mixを免疫することで、IFNg/IL17の高い産生が認められた。さらに、それらの細胞をRag1 KOマウスに移入することで、唾液量の低下、およびCD4陽性T細胞の唾液腺への浸潤が認められた。これらのことから、今回樹立したマウスがSSにおいて有用なモデルであることが考えられた。今後、このモデルを用いてのSSの新規治療法の開発が期待される。

Purpose: Salivary gland-specific self-antigen M3 シェーグレン syndrome (SS) and アセチルコリン receptor (M3R) をターゲMade by ットとし, SS モデルマウスの, used by およびモデルマウスをいてSSの発 syndrome, the progress of the machine sequence を明らかにすることをpurpose and とした. Method: 1) M3R extracellular domain をコードするsynthesis ペプチドのmix(それぞれ20ug)とComplete Fiberglass (CFA) Fiberglass Manufacturer, M3R Defective Matrix (M3R KO)にimmuneをした. An additional dose of M3R peptide mix should be administered 10 days after the first vaccination. After 10 days of supplementary immunization, the spleen cells were separated, the M3R peptide mix antigen was used, and the spleen cells were cultured for 72 hours. 2) After 10 days of supplementary immunization, the spleen cells of Rag1-deficient MAS (Rag1 KO) were transplanted into the spleen at 1x10^7 cells. The amount of saliva and the level of anti-M3R antibodies in the serum were measured 45 days after the transplantation. 3) Salivary glands, salivary glands and salivary glands 45 days after transplantation, HE staining, immunohistochemical staining, and histological examination. Result: 1) M3R peptide mix immune C57BL/6 マウスと comparison, M3R KO-derived spleen cells, IFNγ, IL17, high production and recognition. 2) Splenocytes derived from C57BL/6 have been transplanted into Rag1, and spleen cells derived from M3R KO have been transplanted into Rag1. KOマウスにおいて, the amount of saliva is reduced and the amount of saliva is reduced.また、同マウスにおいて、anti-M3R antibody が検出された. 3) 45 days after transplantation, M3R KO-derived splenocytes were transplanted into Rag1 KO salivary gland salivary gland cells and infiltrated into the cells. The irritation of the glands is the same as the infiltration of the glands.さらに, immunohistological staining results から, infiltration しているほとんどの cells and CD4-positive T cells であることが明らかとなった. On one side, the infiltration of B cells and CD8-positive cells was detected. Investigation: M3R KO マウスにM3R peptide mixをimmune することで, IFNg/IL17 のHigh いproduction がidentification められた.さらに, それらのcells をRag1 KO マウスに migrates into することで, salivary volume is low, およびCD4-positive T cells infiltrate the salivary glands and められた.これらのことから、This time the establishment of したマウスがSSにおいて is useful and なモデルであることが考えられた. From now on, I am looking forward to using the new standard treatment method of SS in the future.