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胸腺細胞の分化過程におけるクローディン4の発現制御と機能に関する研究

胸腺细胞分化过程中claudin-4的表达调控及功能研究

基本信息

批准号：
07J09376
负责人：
藤田春美
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J09376/
关键词：
免疫細胞接着胸腺 T細胞分化接着分子胸腺細胞

项目摘要

昨年度、胸腺細胞特異的にCld4の発現を消失させるためCld4 floxマウスを作出したが、ES細胞をスクリーニングする際に用いたNeo floxカセットがCld4のプロモーター領域に挿入されており、Cld4の発現に干渉していることが問題となっていた。そこでgermilineでCreを弱く発現するEIIA-Creマウスと交配しNeo floxカセットのみの除去を試みた。その結果、Neo floxのみが抜けた個体が複数得られ、現在このマウスをLck-creマウスと交配することにより、Cld4の胸腺細胞特異的ノックアウトを試みている。一方、Cld4 floxマウスをgermileでCreを強発現するCAG-Creと交配することにより、Cld4の発現が全身で消失されたCld4 Nul1マウスが作出された。現在まだB6系統への戻し交配中であるためpreliminaryなデータではあるが、現在のところ、胸腺T細胞分化の異常は認められていない。また、Cld4を発現しているDP胸腺細胞における抗原反応性の低下といった表現型も認められていない。しかしながら、末梢リンパ組織・末梢血中におけるT細胞について解析を行ったところ、全白血球中のCD4/CD8T細胞の割合が減少することが確認された。また、CD4 T細胞を固層化抗CD3抗体とともにin vitroで培養したところ、野生型CD4 T細胞と比べて増殖反応・サイトカイン産生など刺激反応性の低下が認められた。現時点ではこれが胸腺T細胞におけるCld4の消失によるものか、あるいは全身的にCld4を消失させたことによる副次的効果であるかは確認されていないが、現在作成中のCld4 flox・Lck-creマウスを解析することにより明らかになると期待している。この表現型が胸腺T細胞におけるCld4の消失によるものであれば、胸腺におけるイベントがどのように末梢T細胞に影響を及ぼしているのかが論点となる。末梢T細胞の恒常性維持・T細胞レパトア形成などにフォーカスして解析を行う予定である。

Last year, thymocyte-specific Cld4 expression disappeared, and ES cells were used to detect Cld4 expression. EIIA-Cre is a new breed of germiline. As a result, Neo flox and thymocytes were found to be multiple, and now they were found to be Lck-cre and mating, and CD4 thymocyte-specific. A party, Cld4 flox, germile, Cre, strong presence, CAG-Cre, mating, Cld4 presence, whole body disappearance, Cld4 Nul1 presence, strong presence, CAG-Cre, mating, mating. The B6 system is now in the process of mating, and the thymus T cell differentiation is abnormal The expression of CD4 in DP thymocytes was significantly lower than that in control group. It was confirmed that CD4/CD8 T cell cleavage in peripheral tissues and peripheral blood decreased. CD4 T cells solidify anti-CD3 antibodies in vitro, and wild-type CD4 T cells produce anti-CD3 antibodies that stimulate anti-CD3 activity. The current point is that the Cld 4 in the thymus disappears and the secondary effect is confirmed. Now, the Cld4 in the thymus is analyzed and expected. This phenotype affects T cells in the thymus and peripheral T cells in the thymus The homeostasis of peripheral T cells is maintained. T cells are formed in a predetermined manner.