蛍光を検出原理とした新規プロテインキナーゼ活性検出法の開発とその医薬への応用

以荧光为检测原理的新型蛋白激酶活性检测方法的开发及其在医学上的应用

• 批准号: 07J10546
• 负责人: 秋田 昌二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J10546/
• 关键词: プロテインキナーゼ; アッセイ; 蛍光; ペプチドアレイ

プロテインキナーゼは、細胞内情報伝達において主要な役割を果たし、生命活動の維持や疾病の発現に関与する重要な酵素である。本研究の目的は、プロテインキナーゼの蛍光アッセイ法の開発である。既に、リン酸化セリン・トレオニンの化学反応性を利用し、オンビーズでのセリン・トレオニンキナーゼ活性の蛍光検出に成功しているが、オンビーズアッセイには欠点(分子量の大きなキナーゼに適用できない)があった。そこで、本年度は、オンビーズアッセイの欠点を克服して、より汎用性の高いアッセイ法とするため、検出原理のペプチドアレイへの適用を目指した。アレイ用の蛍光検出器に適用可能かつリン酸化検出に適した蛍光試薬の開発を進め、新規ローダミン誘導体の開発に成功した。開発した試薬を用い、セルロースメンブレン上に作製したペプチドアレイを用いてセリン・トレオニンキナーゼの活性検出を行った。プロテインキナーゼA(PKA)及びAkt-1という2種のキナーゼの活性検出に成功した。Akt-1の分子量は、オンビーズアッセイには適用できない大きさであるため、ペプチドアレイを用いることで、オンビーズアッセイの欠点を克服できたといえる。次に、PKAに対する2種の阻害剤の評価を試みた。その結果、いずれの阻害剤も妥当な阻害活性を示し、本検出法が阻害剤スクリーニングに適用しうることが明らかとなった。ガラス基板上に作製したペプチドアレイについても、リン酸化ペプチドを検出できることを確認しており、今後、キナーゼアッセイへ展開する予定である。以上のように、本年度は、これまでのオンビーズアッセイの欠点を克服し、様々なキナーゼの活性検出や阻害剤のハイスループットスクリーニングへの適用に期待できる結果を得た。

The main tasks of the patients are to cut the fruits, maintain the activities of life and maintain the disease and the important enzymes in the cells. In this study, the purpose of this study is to conduct a comprehensive study on the purpose of this study. The chemical reaction was detected by chemical reaction, the chemical reaction was used, the chemical reaction was detected, the chemical reaction was used, the chemical reaction was analyzed. This year, please do not know how to overcome your problems, how to overcome your problems, how to use your eyes to overcome your shortcomings, and how to use your eyes. By using the optical transmitter, you can use the possible acidizing method to improve the performance of the system, and the new regulations will cause the system to operate successfully. Please make sure that you do not know how to use the information, and that you can use the information to improve the performance of the system. We tested the activity of PKA and Akt-1 to show success. Akt-1 molecular weight, molecular weight and molecular weight. The second time, PKA test 2 will block the performance of the test. The results show that the blocking activity is correct, and this method is used to improve the performance of the system. On the substrate, we need to make sure that we have a problem. From now on, we will be able to open a predetermined device. The above information, the current year, the current year and the current year.